超表达状态下的TMP21对介导阿尔茨海默氏病γ分泌酶复合物活性影响的研究

作     者：董贵成 王迎春 阿拉坦高勒 王静 门中华 赵俊利 博.格日勒图 DONG Gui-cheng;WANG Ying-chun;Alatagaole;WANG Jing;MEN Zhong-hua;ZHAO Jun-li;BO Geriletu

作者机构：内蒙古大学生命科学学院内蒙古呼和浩特010021 内蒙古科技大学包头师范学院内蒙古包头014030 内蒙古农业大学动物科学与医学学院内蒙古呼和浩特010018 

出 版 物：《内蒙古师范大学学报（自然科学汉文版）》 (Journal of Inner Mongolia Normal University(Natural Science Edition))

年 卷 期：2009年第38卷第2期

页      面：203-208页

学科分类：0710[理学-生物学] 071010[理学-生物化学与分子生物学] 081704[工学-应用化学] 07[理学] 08[工学] 0817[工学-化学工程与技术] 

基　　金：国家自然科学基金资助项目(30760212) 内蒙古自然科学基金资助项目(200408020910) 

主　　题：脱氧核糖核酸超表达 转运膜蛋白21 γ分泌酶活性 酶联免疫反应 免疫印迹反应 

摘      要：研究转运膜蛋白21(TMP21)在小鼠成纤维细胞中超表达状态下,对γ分泌酶活性的影响.利用TMP21 cDNA转染敲除淀粉样前体蛋白表达基因的小鼠胚胎成纤维细胞系(MEF(KO)),以梯度浓度G418筛选TMP21表达量最高的细胞.处理超表达组(T)和对照组(C)细胞,并收集纯化含γ分泌酶复合物的样本.用Western blotting检测TMP21蛋白表达量,选用饱和浓度的γ分泌酶底物C99,运用ELISA检测A-βpeptide40和A-βpeptide42的生成总量.结果表明,样本T1、T2及IPT2所含TMP21的蛋白表达量较相应对照组样本C1、C2和IPC2分别上升11.5%(P=0.08),28.1%(P0.01),69.1%(P0.001),提示经TMP21 cDNA转染后MEF(KO)细胞中TMP21蛋白表达明显提高.同时,对照样本C1、C2及IPC2,样本T1、T2及IPT2中所含γ分泌酶活性分别降低33.4%(P=0.01),71.9%(P0.001),96.5%(P0.001).转染组样本中,样本IPT2所含γ分泌酶活性最低,提示经处理γ分泌酶得到明显纯化分离,与Western blotting所得结果一致.因此,高表达状态下的TMP21蛋白,对MEF(KO)细胞中γ分泌酶的活性具有明显的降低作用,表明TMP21为γ分泌酶的负调控因子之一.