栓菌漆酶在毕赤酵母中高效表达及重组酶的性质

作     者：周宏敏 洪宇植 肖亚中 CUI Teng-Jiao WANG Xiao-Tang 蒲春蕾 ZHOU Hong-Min;HONG Yu-Zhi;XIAO Ya-Zhong;CUI Teng-Jiao;WANG Xiao-Tang;PU Chun-Lei

作者机构：安徽大学生命科学学院＆现代实验技术中心合肥230039 佛罗里达国际大学化学与生物化学系迈阿密FL33199美国 中国科学技术大学生命科学学院合肥230026 

出 版 物：《生物工程学报》 (Chinese Journal of Biotechnology)

年 卷 期：2007年第23卷第6期

页      面：1055-1059页

核心收录：

学科分类：0710[理学-生物学] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 071007[理学-遗传学] 0901[农学-作物学] 0836[工学-生物工程] 090102[农学-作物遗传育种] 

基　　金：国家自然科学基金(Nos30370045 30470056和30670069) 安徽省优秀青年基金(No04043048) 安徽省教育厅自然基金重点(No2006KJ049A) 国家863高技术研究与发展计划项目(No2007AA09Z421) 安徽大学211创新团队计划(No02203109)资助~~ 

主　　题：异源表达 高密度发酵 漆酶 毕赤酵母 栓菌420 

摘      要：栓菌420（Trametes sp．420）漆酶基因lacD以两种方式在巴斯德毕赤酵母（Pichiapastoris）进行异源表达，产生两种重组漆酶：rLacDx（具有天然N-末端）和rLacDe（N-末端带有8个额外的氨基酸残基）。摇瓶发酵18d，rLacDx和rLacDe的产量分别为1．21×10^5u／L、7、38×10^4u／L[以2，2＇-连氮-3-乙苯-二噻唑-6磺酸（ABTS）为底物]。在高密度发酵条件下，rLacDx的产量增加到2．39×10^5u／L，同时其生产周期降至7．5d。两种重组酶对愈创木酚底物的氧化特性相似，且在50℃和pH3～10的范围内均稳定。然而，rLacDx对底物ABTS的比活力（1761u／mg）高于rLacDe（1122u／mg），其表观Km值（427μmol／L）低于rLacDe（604μmol／L）。