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以甘油为碳源分批补料高密度发酵产环氧化物水解酶

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高校化学工程学报 2014年第3期28卷 600-605页

作者：陈冠宇袁建锋吴绵斌林建平杨立荣浙江大学生物质化工教育部重点实验室浙江大学化学工程与生物工程学系浙江杭州310027

环氧化物水解酶能够立体选择性地催化环氧化合物生成相应的二醇,具有重要的工业应用价值。通过摇瓶实验研究了不同甘油浓度对重组大肠杆菌Rosetta(DE3)/pET28(a)-CESH生长的影响,确定了IPTG最佳诱导时机、诱导浓度和诱导后培养温度。在1... 详细信息

环氧化物水解酶能够立体选择性地催化环氧化合物生成相应的二醇,具有重要的工业应用价值。通过摇瓶实验研究了不同甘油浓度对重组大肠杆菌Rosetta(DE3)/pET28(a)-CESH生长的影响,确定了IPTG最佳诱导时机、诱导浓度和诱导后培养温度。在15 L发酵罐进行放大培养,对比分批补料和批次发酵,前者生产率达6.71×105 U·(L·h)-1,比批次发酵提高了33.3%,酶活达到2.0×107 U·L-1,所用的时间,比批次发酵缩短了10 h,适合于工业应用。

关键词：重组大肠杆菌环氧化物水解酶高密度发酵甘油抑制

毕赤酵母重组菌高密度发酵产疏绵状嗜热丝孢菌脂肪酶

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中国食品学报 2018年第7期18卷 99-107页

作者：蔡海莺 Dumba Trish 张婷来佳赵敏洁李杨于林凯张辉冯凤琴浙江省农业生物资源生化制造协同创新中心浙江省农产品化学与生物加工技术重点实验室浙江科技学院生物与化学工程学院杭州310023 浙江大学生物系统工程与食品科学学院杭州310058

疏绵状嗜热丝孢菌脂肪酶TLL是一种热稳定、具有位置专一性等良好属性和应用前景的脂肪酶,已成功在多种宿主中实现重组表达。本研究构建含前导肽的TLL脂肪酶毕赤酵母重组工程菌,在摇瓶水平对该重组工程菌的培养和诱导条件进行优化,通过... 详细信息

疏绵状嗜热丝孢菌脂肪酶TLL是一种热稳定、具有位置专一性等良好属性和应用前景的脂肪酶,已成功在多种宿主中实现重组表达。本研究构建含前导肽的TLL脂肪酶毕赤酵母重组工程菌,在摇瓶水平对该重组工程菌的培养和诱导条件进行优化,通过单因素试验,得到的最佳发酵条件:1.5%(体积分数)甲醇,pH 7.0,质量分数0.5%玉米油和0.1%阿拉伯胶,该条件下摇瓶发酵最高酶活为2 265.3 U/mL。以甲醇为唯一碳源进行高密度发酵,202 h后菌体OD600值达到最高282,对应发酵上清液的最高酶活为22 561.4 U/mL。参考摇瓶优化结果,采用辅助碳源与甲醇共诱导高密度发酵,培养和诱导208 h后,最终菌体OD600值达到362,对应发酵上清液的最高酶活为24 522.6 U/mL,较以甲醇为唯一碳源的对应值分别提高了28.37%和10.87%。另外,最高酶活较摇瓶水平发酵的最高酶活2 265.3 U/mL提高10.83倍,表明高密度发酵和共诱导是大幅提高酵母表达重组TLL蛋白的重要手段。

关键词：疏绵状嗜热丝孢菌脂肪酶高密度发酵毕赤酵母重组表达共诱导

基于人工神经网络和遗传算法的普鲁兰酶重组大肠杆菌高密度发酵工艺优化

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食品科学 2021年第10期42卷 73-78页

作者：迟雷王静雨侯俊超魏佳佳魏涛胡晓龙何培新郑州轻工业大学食品与生物工程学院河南郑州450000

基于人工神经网络和遗传算法,对重组大肠杆菌(Escherichia coli)BL 21表达热稳定普鲁兰酶的高密度发酵工艺进行优化。在5 L的发酵罐中,通过比较不同发酵温度、pH值及培养基碳氮比(C/N,mol/mol)对细胞量和产物产量的影响,确定最佳发酵工... 详细信息

基于人工神经网络和遗传算法,对重组大肠杆菌(Escherichia coli)BL 21表达热稳定普鲁兰酶的高密度发酵工艺进行优化。在5 L的发酵罐中,通过比较不同发酵温度、pH值及培养基碳氮比(C/N,mol/mol)对细胞量和产物产量的影响,确定最佳发酵工艺。结果表明,诱导前适合细胞生长的发酵条件为发酵温度34.4℃、pH 6.87、培养基C/N 6.1;诱导后适合产物表达的发酵条件为发酵温度32.5℃、pH 6.69、培养基C/N 5.3,最终获得细胞质量浓度56.5 g/L,重组蛋白产量3.21 g/L,酶活力为268.3 U/mL。

关键词：重组普鲁兰酶神经网络遗传算法高密度发酵

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高密度发酵在酒精生产中的应用进展

化工进展 2009年第11期28卷 1996-2002,2023页

作者：包莹玲陈砺严宗诚王红林华南理工大学化学与化工学院广东广州510640

酒精不仅是重要的可再生能源,在食品、化工、医药等领域应用也极其广泛。高密度发酵(HCDF)能有效提高酒精产率降低能耗及废液排放,极具应用潜力。本文针对目前淀粉质原料HCDF中酵母选育、培养条件优化、工艺过程优化同步耦合及动力学模... 详细信息

酒精不仅是重要的可再生能源,在食品、化工、医药等领域应用也极其广泛。高密度发酵(HCDF)能有效提高酒精产率降低能耗及废液排放,极具应用潜力。本文针对目前淀粉质原料HCDF中酵母选育、培养条件优化、工艺过程优化同步耦合及动力学模型的多元统计控制,综合分析了神经交叉网络-模糊控制和基于经验的实验系统等国内外最新进展,旨在为HCDF酒精生产工艺的进一步研究提供参考依据。

关键词：高密度发酵酒精酿酒酵母

新型重组别藻蓝蛋白的高密度发酵生产和升白作用

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高技术通讯 2005年第8期15卷 96-99页

作者：杨雨周小龙林凡葛保胜王庭健韩璐窦昌贵秦松中国科学院海洋研究所青岛266071中国科学院研究生院北京100049 中国药科大学南京210038 中国科学院海洋研究所青岛266071

在工程菌株JM109中实现了带有6×His标记的新型重组别藻蓝蛋白HAPC的高效表达.工程菌的发酵采用两步法,37℃扩增生长6h,30℃诱导培养10h.发酵液最终菌体密度(OD600)达26.25,表达蛋白占菌体总蛋白的31%.进一步用金属螯合亲和层析纯化使... 详细信息

在工程菌株JM109中实现了带有6×His标记的新型重组别藻蓝蛋白HAPC的高效表达.工程菌的发酵采用两步法,37℃扩增生长6h,30℃诱导培养10h.发酵液最终菌体密度(OD600)达26.25,表达蛋白占菌体总蛋白的31%.进一步用金属螯合亲和层析纯化使其纯度达90%以上.用纯化的HAPC对S180荷瘤小鼠灌胃,每天1.5～4.5mg/kg,共10天.结果表明HAPC具有明显的升白作用,可对抗环磷酰胺对免疫系统的破坏作用.

关键词：新型重组别藻蓝蛋白(HAPC) 高密度发酵纯化升白别藻蓝蛋白发酵生产重组高密度工程菌株层析纯化

高密度发酵和真空冷冻干燥工艺对乳酸菌抗冷冻性的影响

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微生物学通报 2013年第3期40卷 492-499页

作者：刘彩虹邵玉宇任艳孟和毕力格张和平内蒙古农业大学乳品生物技术与工程教育部重点实验室内蒙古呼和浩特010018

经真空冷冻干燥得到的乳酸菌发酵剂存活率和后期的低温贮藏稳定性与诸多因素相关。本文综述了制备乳酸菌发酵剂过程中高密度发酵和真空冷冻干燥工艺的不同对乳酸菌抗冷冻性的影响,其中高密度发酵过程中的培养基组分、培养温度、发酵恒... 详细信息

经真空冷冻干燥得到的乳酸菌发酵剂存活率和后期的低温贮藏稳定性与诸多因素相关。本文综述了制备乳酸菌发酵剂过程中高密度发酵和真空冷冻干燥工艺的不同对乳酸菌抗冷冻性的影响,其中高密度发酵过程中的培养基组分、培养温度、发酵恒定pH、中和剂的选择、菌体收获时期和发酵结束后处理以及真空冷冻干燥过程中保护剂的添加、预冷冻处理等是影响乳酸菌抗冷冻性的重要因素。通过对这些相关因素的综述分析,为提高乳酸菌发酵剂的冻干存活率和后期的低温贮藏稳定性提供新的思路,且应用抗冷冻性强、活力高的乳酸菌发酵剂对有效提高乳制品的质量和企业的经济效益意义重大。

关键词：乳酸菌高密度发酵真空冷冻干燥抗冷冻性

重组牛乳铁蛋白功能片段在毕赤酵母中的表达及高密度发酵

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食品与发酵工业 2019年第11期45卷 29-33页

作者：魏春任郑吴涛钱晓芬孙杰汪钊浙江工业大学生物工程学院

该研究合成了密码子优化后的牛乳铁蛋白功能片段(bovine lactoferrin functional fragment, BlfFf ),转入毕赤酵母GS115中重组表达并筛选抗性菌株,通过镍亲和层析纯化BlfFf,以Western Blot、液质联用和ELISA对重组蛋白进行鉴定及检测。... 详细信息

该研究合成了密码子优化后的牛乳铁蛋白功能片段(bovine lactoferrin functional fragment, BlfFf ),转入毕赤酵母GS115中重组表达并筛选抗性菌株,通过镍亲和层析纯化BlfFf,以Western Blot、液质联用和ELISA对重组蛋白进行鉴定及检测。比较了5 L发酵罐生产中3种不同高密度发酵培养基对BlfFf生产的影响。结果表明:重组转化子正确表达了BlfFf。镍亲和层析中,150 mmol/L咪唑洗脱可得到电泳纯37 kDa的目标条带。在3种高密度发酵培养基中,RDM最优,诱导48 h,菌体湿细胞密度达到297 g/L,BlfFf表达量为38.1 mg/L。

关键词：牛乳铁蛋白毕赤酵母高密度发酵分泌表达纯化鉴定

棘孢曲霉β-葡萄糖苷酶I的毕赤酵母多拷贝体系构建及其在高密度发酵中的表达

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现代食品科技 2014年第6期30卷 70-75页

作者：陈文勇胡霞艳康雅君郑穗平华南理工大学生物科学与工程学院广东广州510006

β-葡萄糖苷酶目前广泛应用于合成烷基糖苷、芳基糖苷和辅助纤维素酶水解纤维素。本研究将来自棘孢曲霉(Aspergilus aculeatus)的β-葡萄糖苷酶I(ABGL)在毕赤酵母中通过构建多拷贝表达盒的方法实现高效表达,利用同尾酶Bgl II/BamH I反... 详细信息

β-葡萄糖苷酶目前广泛应用于合成烷基糖苷、芳基糖苷和辅助纤维素酶水解纤维素。本研究将来自棘孢曲霉(Aspergilus aculeatus)的β-葡萄糖苷酶I(ABGL)在毕赤酵母中通过构建多拷贝表达盒的方法实现高效表达,利用同尾酶Bgl II/BamH I反复酶切和用DNA连接酶连接的方法,成功构建了含多拷贝表达盒5’AOX-ABGL-TT的pHKA-(ABGL)3的分泌重组质粒,并线性化重组质粒转化毕赤酵母GS115,经过七叶苷显色筛选平板筛选获得高表达的GS115/pHKA-(ABGL)3菌株,且在50升发酵罐实现高密度发酵表达。研究表明,以pNPG为水解底物,在甲醇诱导120 h时摇瓶发酵液上清酶活可达83.15 U/mL,较之前报道的酶活提高了3.35倍;同时在50 L发酵罐实现高密度发酵,在甲醇诱导120 h时发酵罐上清酶活可达979 U/mL,较对照菌株的发酵罐上清液酶活提高2.94倍,且总蛋白表达量可以达到12 g/L。

关键词：棘孢曲霉NO F-50 β-葡萄糖苷酶多拷贝表达盒毕赤酵母分泌表达高密度发酵

大肠杆菌高密度发酵表达4-羟基苯乙酸酯3-羟化酶及咖啡酸的高效生物合成

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生物工程学报 2022年第9期38卷 3466-3477页

作者：张红林金连胡定行刘贵友孙磊广州中医药大学中药学院广东广州510006 江苏第二师范学院生命科学与化学化工学院江苏南京211200

来源于大肠杆菌的4-羟基苯乙酸酯3-羟化酶(4-hydroxyphenylacetate 3-hydroxylase,4HPA3H)可以催化对香豆酸生物合成咖啡酸。为了实现4HPA3H的扩大生产和咖啡酸的高效生物合成,首先构建过表达4HPA3H的大肠杆菌工程菌,其次使用5 L发酵罐... 详细信息

来源于大肠杆菌的4-羟基苯乙酸酯3-羟化酶(4-hydroxyphenylacetate 3-hydroxylase,4HPA3H)可以催化对香豆酸生物合成咖啡酸。为了实现4HPA3H的扩大生产和咖啡酸的高效生物合成,首先构建过表达4HPA3H的大肠杆菌工程菌,其次使用5 L发酵罐进行高密度发酵生产4HPA3H,再而优化采用工程菌株进行全细胞催化产咖啡酸的条件。最终实现了在5 L发酵罐中发酵,工程菌株生物量达到干重34.80 g/L。通过使用5 L发酵罐作为生物反应器进行全细胞催化,经过6 h的催化可产生18.74 g/L(0.85 g/(L·OD600))咖啡酸,摩尔转化率为78.81%,是目前文献报道4HPA3H以对香豆酸为底物合成咖啡酸的最高水平。初步实现了高密度培养大肠杆菌表达4HPA3H并高效生物合成咖啡酸,为工业化生产奠定了基础。

关键词： 4-羟基苯乙酸酯3-羟化酶咖啡酸高密度发酵全细胞催化