我国部分地区28种蚊虫的线粒体COⅠ基因序列分析

作     者：郭玉燕 罗雷 宋璋瑶 郑学礼 GUO Yu-yan;LUO Lei;SONG Zhang-yao;ZHENG Xue-li

作者机构：南方医科大学公共卫生学院病原生物学系 广州市疾病预防控制中心消毒杀虫部 

出 版 物：《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》 (Chinese Journal of Parasitology and Parasitic Diseases)

年 卷 期：2017年第35卷第3期

页      面：280-287页

核心收录：

学科分类：1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 100103[医学-病原生物学] 10[医学] 

基　　金：国家自然科学基金(No.31630011) 广东省科技计划(No.2013B021800042) 广东省自然科学基金(No.2015A030313784)~~ 

主　　题：蚊虫 线粒体细胞色素C氧化酶亚基Ⅰ 分子标记 

摘      要：目的分析我国部分地区28种蚊虫的线粒体细胞色素c氧化酶亚基Ⅰ(mitochondrion cytochrome c oxidase subunitⅠ,COⅠ)基因序列,探讨其作为蚊虫分子标记的应用潜力。方法 2015年3月至2016年10月在我国海南、广东、广西、云南、福建、浙江、河南、山西、天津、内蒙古、吉林和黑龙江等12省(自治区、直辖市)的蚊虫孳生地采集幼虫,室内饲养至羽化成蚊,在蚊虫栖息地和蚊虫监测点,采用灯诱法和人诱法采集成蚊。所有成蚊经形态学鉴定后,提取单只蚊虫基因组DNA,采用国际双翅目通用引物PCR扩增并克隆线粒体COⅠ基因5′端片段,并进行测序。所得COⅠ基因序列上传Gen Bank获取登录号。序列通过Clustal1.83和MEGA5.05软件进行多序列比对,用DNAMAN9.0软件分析同源性。采用Mega5.05软件进行序列特征分析、计算遗传距离。每种蚊虫随机选择1~4条线粒体COⅠ基因序列,采用邻接法(NJ)构建系统发育进化树。结果共采集3亚科6属28种301只蚊虫,分别为伊蚊属(Aedes)的白纹伊蚊(***)等5种、按蚊属(Anopheles)的中华按蚊(***)等6种(亚种)、库蚊属(Culex)的二带喙库蚊(***)等14种(亚种)、阿蚊属(Armigeres)的骚扰阿蚊(***)、曼蚊属(Mansonia)的常型曼蚊(***)和巨蚊属(Toxorhynchites)的华丽巨蚊(***)。PCR扩增结果显示,28种蚊虫线粒体COⅠ基因的长度约711 bp,经多序列比对排齐后长度为651 bp。不同种别蚊虫的线粒体COⅠ序列同源性范围为97.85%~99.97%。种内K2P遗传距离为0.15%~2.89%,属内种间遗传距离为0.25%~14.50%。其中,按蚊属6种蚊虫COⅠ序列存在153个变异位点,131个简约信息位点,T+A平均含量为67.70%;编码的217个氨基酸残基中保守氨基酸206个(占94.9%);6种蚊虫的核苷酸同源性为98.31%~99.72%,种内K2P遗传距离为0.41%~1.56%,种间K2P遗传距离为1.07%~14.50%。28种蚊虫(60条)COⅠ序列的系统发育树分析结果显示,种团内近缘种(尖音库蚊、淡色库蚊和致倦库蚊)聚在一起,但近缘种之间未完全隔开;白跗按蚊(***)和迷走按蚊(***)聚在一起,其余23种蚊虫分别以种为单位聚在一起。结论基于线粒体COⅠ基因的分子标记可以区分捕获蚊虫的部分蚊种,但尚未能有效及准确地区分近缘种。