兔抗人CD1d分子α3结构域抗体的制备与鉴定

作     者：陈章权 黄震 梁晓东 何天文 陆田田 CHEN Zhang-quan;HUANG Zhen;LIANG Xiao-dong;HE Tian-wen;LU Tian-tian

作者机构：广东医学院临床免疫学教研室广东湛江524023 

出 版 物：《细胞与分子免疫学杂志》 (Chinese Journal of Cellular and Molecular Immunology)

年 卷 期：2008年第24卷第3期

页      面：250-252页

核心收录：

学科分类：1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 100102[医学-免疫学] 10[医学] 

基　　金：广东省中医药局科研基金资助项目(1060043) 

主　　题：CD1d α3结构域 表达 抗体 制备 

摘      要：目的:制备兔抗人CD1d分子α3结构域(hCD1d-α3)多克隆抗体。方法:PCR法扩增出人hCD1d-α3编码区基因,将其克隆入原核表达载体pET28中,转化大肠杆菌BL21(DE3),用IPTG诱导重组蛋白的表达,用Ni2+-NTA Agarose亲和层析法纯化重组蛋白,以之为免疫原免疫家兔,制备多克隆抗体,并用ELISA、Western blot及免疫组织化学法检测抗体。结果:成功构建了hCD1d-α3原核表达载体pET28/h CD1d-α3,高效表达并纯化hCD1d-α3蛋白,间接ELISA检测所制备抗体的效价为1∶6400,Western blot显示该抗体能与hCD1d特异结合,免疫组织化学法检测结果表明该抗体识别人小肠组织中的天然hCD1d。结论:通过制备重组hCD1d-α3蛋白为免疫原,免疫家兔,成功地制备了效价高、特异性好的抗hCD1d-α3多克隆抗体。