基于FLUOstar平台的小麦dsDNA荧光定量与基因型分析

作     者：肖永贵 Susanne DREISIGACKER Claudia NUNEZ-RIOS 胡卫国 夏先春 何中虎 XIAO Yong-Gui;Susanne DREISIGACKER;Claudia NU?EZ-RíOS;HU Wei-Guo;XIA Xian-Chun;HE Zhong-Hu

作者机构：中国农业科学院作物科学研究所、国家小麦改良中心北京100081 International Maizeand Wheat Improvement Center(CIMMYT)06600 MéxicoDFMéxico 河南省农业科学院小麦研究所河南郑州450002 CIMMYT中国办事处北京100081 

出 版 物：《作物学报》 (Acta Agronomica Sinica)

年 卷 期：2017年第43卷第7期

页      面：947-953页

核心收录：

学科分类：0710[理学-生物学] 0831[工学-生物医学工程（可授工学、理学、医学学位）] 09[农学] 0901[农学-作物学] 0836[工学-生物工程] 0902[农学-园艺学] 

基　　金：国家重点研发计划项目(2016YFD0101804-6) 国家自然科学基金项目(31671691) 国家科技支撑计划项目(2014BAD01B05) 科技部国际合作项目(2013DFG30530)资助~~ 

主　　题：普通小麦 dsDNA 荧光定量 显性标记 分子育种 

摘      要：双链DNA(dsDNA)定量分析是植物分子生物学研究的基础,对基因型分析尤为重要。本研究以λ噬菌体dsDNA为标准样品,建立了荧光定量标准曲线,探讨荧光核酸定量通量性及其与紫外法定量的差异,并分析荧光染料在基因分型中的应用。结果表明,荧光染料能够对dsDNA进行高效微量定量分析(1.1ngmL-1),但因鉴定核酸的浓度较低,对小麦籽粒和叶片全基因组DNA定量时稀释倍数较大,易增大浓度误差。降低反应体系量导致标准曲线决定系数降低,影响测量准确性。精确定量dsDNA浓度时,总反应体系应大于200mL;对PCR产物进行基因分型时,总反应体系应不低于40mL。相同DNA模板浓度下,FLUOstar平台可以对抗秆锈病基因显性标记csSr32#1(Sr32)和IB-267(Sr50)的PCR产物进行基因型分型,判断准确率为100%。对特异性强且等位基因片段差异大(≥100bp)的共显性标记,如抗叶锈病基因标记We173(Yr26)等,用荧光染料同样可以进行基因分型。与琼脂糖凝胶电泳相比,荧光染料鉴定等位基因价格略高,但方法简单、准确快速、重现性好,可用于分子育种中世代材料快速筛选。