利用CRISPR/Cas9系统构建HeLa细胞Cdc25C基因敲除稳定细胞株

作     者：姚叶豹 王广菲 董钦才 曹诚 刘萱 YAO Ye-bao;WANG Guang-fei;DONG Qing-cai;CAO Cheng;LIU Xuan

作者机构：军事医学科学院生物工程研究所北京100850 

出 版 物：《军事医学》 (Military Medical Sciences)

年 卷 期：2017年第41卷第5期

页      面：359-362页

学科分类：0710[理学-生物学] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 071007[理学-遗传学] 0901[农学-作物学] 0836[工学-生物工程] 090102[农学-作物遗传育种] 

基　　金：国家自然科学基金资助项目(31470761) 

主　　题：CRISPR/Cas9 Cdc25C HeLa细胞 细胞周期 

摘      要：目的使用CRISPR/Cas9基因编辑系统敲除人类宫颈癌细胞HeLa中的细胞分裂周期蛋白25同源蛋白C(cell division cycle 25 homolog C,Cdc25C)基因,构建Cdc25C基因稳定敲除细胞株。方法根据CRISPR/Cas9靶点设计规则,设计特异性识别Cdc25C基因第一外显子相关序列的上下游小向导RNA(small guide RNA,sgRNA),构建真核重组表达质粒。测序鉴定后,将重组质粒转染至HeLa细胞中,用嘌呤霉素(puromycin)抗性筛选稳定敲除Cdc25C基因细胞株,再用免疫印迹方法鉴定细胞Cdc25C敲除效果。最后用流式细胞仪检测基因敲除对细胞周期的影响。结果筛选出稳定敲除Cdc25C基因细胞株,且Cdc25C敲除显著影响G2/M期进程。结论利用CRISPR/Cas9技术成功获得了内源Cdc25C基因敲除细胞株,为研究Cdc25C在细胞周期进程的功能以及相关癌症的发生奠定了基础。