翼螺旋转录因子FOXO1的DNA结合域的表达、纯化及结合特性

作     者：哈依努尔 李俊 陈永恒 陈林 陈主初 HA Yinuer LI Jun CHEN Yongheng CHEN Lin CHEN Zhuchu

作者机构：中南大学湘雅医院卫生部肿瘤蛋白质组学重点实验室长沙410008 新疆医科大学第一附属医院呼吸科乌鲁木齐830000 南加州大学化学与生命科学系美国洛杉矶90089 

出 版 物：《中南大学学报（医学版）》 (Journal of Central South University ：Medical Science)

年 卷 期：2017年第42卷第1期

页      面：1-7页

核心收录：

学科分类：1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 10[医学] 

基　　金：国家自然科学基金(81372904) 

主　　题：FOXO1 DNA结合域 表达纯化 凝胶迁移实验 

摘      要：目的:探讨翼螺旋转录因子FOXO1的DNA结合域(FOXO1 DNA binding domain,FOXO1-DBD)的表达、纯化及与DNA的结合特性。方法:采用优化FOXO1-DNA的基因序列和低温诱导的方式实现FOXO1-DBD蛋白的可溶性表达,通过镍亲和层析及阳离子交换层析进行纯化,并经凝胶迁移实验(electrophoretic mobility shift assay,EMSA)验证FOXO1-DBD的DNA结合特性。结果:优化后的FOXO1基因在21℃时编码的蛋白大多以可溶性方式表达,通过两步纯化即可获得95%以上纯度的FOXO1-DBD蛋白,纯化的蛋白与含FOX家族DNA结合基序(G/ATAAACA)的DNA序列显示良好的结合特性。结论:建立了FOXO1-DBD蛋白高效表达、纯化的方法,验证了FOXO1蛋白在识别DNA上的复杂性。