两种原代培养方法对血管平滑肌细胞收缩表型的影响

作     者：周昌钻 郭航远 孟立平 季政 ZHOU Changzuan;GUO Hangyuan;MENG Liping;JI Zheng

作者机构：温州医科大学第一临床医学院浙江温州325035 绍兴市人民医院(浙江大学绍兴医院)心内科浙江绍兴312000 

出 版 物：《温州医科大学学报》 (Journal of Wenzhou Medical University)

年 卷 期：2016年第46卷第12期

页      面：859-864页

学科分类：0710[理学-生物学] 07[理学] 071009[理学-细胞生物学] 09[农学] 0901[农学-作物学] 090102[农学-作物遗传育种] 

基　　金：浙江省自然科学基金资助项目(LY14H020002) 浙江省医药卫生培育计划(2015PYA013) 

主　　题：血管平滑肌细胞 表型 细胞去分化 细胞分离 原代培养 

摘      要：目的:探究胶原酶消化法和植块法培养原代血管平滑肌细胞(VSMCs)对细胞收缩表型影响的特点。方法:使用Ⅱ型胶原酶消化法和植块法分别离体培养原代VSMCs,并获取第1代、第2代、第4代、第8代、第12代VSMCs,Western blot检测不同代数表型标志蛋白α平滑肌肌动蛋白(SMA-α)、调宁蛋白(calponin)和骨桥蛋白(OPN)表达情况;随后检测不同培养方法间表型标志蛋白表达差异,并用划痕实验和MTT实验检测迁移、增殖水平,免疫荧光检测SMA-α胞内表达。结果:消化法最初可获得明显优于植块法的VSMCs收缩表型,表现为SMA-α和calponin高表达,OPN较低表达,增殖、迁移能力相对较弱。培养至第8代后,2种方法的细胞都发生显著的表型改变,增殖、迁移能力增强且消化法细胞呈现更强的去分化表型趋势。结论:Ⅱ型胶原酶消化法可快速获得良好收缩表型的VSMCs,在第4代前具有优于植块法的收缩表型。