全血和滤纸干血AS-PCR体系的缓冲液研究

作     者：侯志勇 曾皓月 杨会勇 林俊生 王立强 HOU Zhi-yong ZENG Hao-yue YANG Hui-yong LIN Jun-sheng WANG Li-qiang

作者机构：解放军211医院哈尔滨150080 华侨大学生物医学学院泉州362021 

出 版 物：《中国新药杂志》 (Chinese Journal of New Drugs)

年 卷 期：2016年第25卷第24期

页      面：2876-2880页

学科分类：0831[工学-生物医学工程（可授工学、理学、医学学位）] 08[工学] 0836[工学-生物工程] 

基　　金：福建省自然科学基金资助项目(2015J01342) 

主　　题：缓冲液 全血扩增 基因诊断 

摘      要：目的:研制一种以全血和滤纸干血为模板的等位基因特异性PCR(allele-specific polymerase chain reaction,AS-PCR)体系的缓冲液。方法:采用血样直接作为模板,通过引入错配碱基对AS-PCR的特异性进行改进,研制一种新型缓冲液HPEC[p H 9.5,Mg2+3.5 mmol·L^(-1),海藻糖2.5μmol·L^(-1),(NH4)2SO49.6mmol·L^(-1),Tween-20 0.01%],对包含单核苷酸多态性位点(single nucleotide polymorphisms,SNPs)的目的片段进行扩增。结果:该方法成功地实现了以血样和滤纸干血为模板的AS-PCR基因分型。结论:此缓冲液省去了扩增前基因组的提取和纯化,简化了操作过程,降低DNA污染机会和检测技术的复杂性。