建立转座子用于原代树突状细胞转染体系的研究

作     者：杨柳 管峥 吕莎 尹燕锋 苏晓三 Yang Liu Guan Zheng Lu Sha Yin Yanfeng Si Xiaosan

作者机构：昆明医科大学附属甘美医院生物医学实验中心云南昆明650011 

出 版 物：《南开大学学报（自然科学版）》 (Acta Scientiarum Naturalium Universitatis Nankaiensis)

年 卷 期：2016年第49卷第5期

页      面：8-13页

核心收录：

学科分类：0710[理学-生物学] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 071007[理学-遗传学] 0901[农学-作物学] 0836[工学-生物工程] 090102[农学-作物遗传育种] 

基　　金：云南省应用基础研究昆医联合专项(2013FZ290) 

主　　题：转座子 树突细胞 转染 脂质体 

摘      要：应用PCR技术从p EGFP-N1载体扩增获取CMV启动子和EGFP基因,利用限制性内切酶BglⅡ/NotⅠ以及NotⅠ/Eco RⅠ将其插入p T/HB,构成p T-CMV-EGFP重组转座子,p T-CMV-EGFP与SB11转座酶形成睡美人转座系统.采用脂质体与荧光表达载体p EGFP-N1不同配比转染小鼠成纤维细胞系3T3,p TCMV-EGFP与SB11梯度比例转染小鼠肝癌细胞系H22后,经流式细胞术比较阳性细胞率,当条件为脂质体与总DNA质量比为4∶1;转座酶与转座子间质量比为1∶4转染时,细胞阳性率最高(H22悬浮细胞可达42.23%),转染结果较稳定(SD=1.25).通过此优化体系转染小鼠骨髓来源的树突状细胞DCs,经激光共聚焦显微镜显示,能够获得被EGFP修饰的DCs,并通过流式细胞术检测被标记有EGFP的特异DCs阳性率可达20%以上.表明本研究已成功建立了一个可用于原代DCs转染的方法.