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犀角地黄汤合方对脂多糖诱导的人树突状细胞功能的影响

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中国实验血液学杂志 2022年第4期30卷 1176-1181页

作者：杨武霞吴玉红王梦晓倪润丰范栗玮李润杰李萌王爱迪刘宝山天津医科大学天津医科大学总医院天津300041

目的:观察犀角地黄汤合方含药血清(XJDH)对体外诱导的树突状细胞(DC)相关功能的影响,探讨犀角地黄汤合方治疗ITP的作用机制。方法:采集6名健康志愿者外周血样本,利用密度梯度离心法分离出单个核细胞,利用磁珠分选出CD14+单核细胞,用重... 详细信息

目的:观察犀角地黄汤合方含药血清(XJDH)对体外诱导的树突状细胞(DC)相关功能的影响,探讨犀角地黄汤合方治疗ITP的作用机制。方法:采集6名健康志愿者外周血样本,利用密度梯度离心法分离出单个核细胞,利用磁珠分选出CD14+单核细胞,用重组人粒细胞⁃巨噬细胞集落刺激因子(GM⁃CSF)及重组人白介素4(IL⁃4)诱导成DC。将DC分为3组:对照组、模型组和XJDH组。通过CCK⁃8法确定含药血清干预浓度及时间,模型组和XJDH组分别加入终浓度为1μg/mL的脂多糖(LPS)刺激24 h后诱导DC成熟,对照组、模型组加入正常大鼠血清,XJDH组加入犀角地黄汤合方含药血清均干预24 h。利用流式细胞术(FCM)检测DC表面分子CD80,CD83,HLA⁃DR的水平,利用蛋白印迹法(WB)检测细胞TLR4和NF⁃κB表达情况,用酶联免疫吸附测定(ELISA)检测细胞上清液中IL⁃6,IL⁃12,TNF⁃α的水平。结果:与对照组相比,LPS刺激能够使DC表面分子CD80、CD83、HLA⁃DR表达增加,TLR4和NF⁃κB表达随之上升,分泌的相关促炎因子IL⁃6、IL⁃12、TNF⁃α增加(P细胞上清液中IL⁃6、IL⁃12、TNF⁃α水平明显降低(P<0.05)。结论:犀角地黄汤合方含药血清可下调TLR4/NF⁃κB信号通路相关蛋白表达,抑制DC成熟,减少促炎因子的分泌,这可能是犀角地黄汤合方治疗免疫性血小板减少症的机制之一。

关键词：犀角地黄汤合方免疫性血小板减少症树突细胞炎症因子脂多糖

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血小板受体FcγRⅡA免疫学功能研究

中华血液学杂志 2023年第7期44卷 609-614页

作者：张钊周向慧程志鹏胡豫华中科技大学同济医学院附属协和医院血液科武汉430022

血小板是来源于巨噬细胞的无核片段,广泛分布于人体血液循环中,其在生理性止血与病理性血栓形成中均发挥着重要作用[1]。近年来的研究表明,血小板在免疫应答及炎症反应中同样有着极其重要的作用[2]。血小板在免疫方面的作用包括病原体... 详细信息

血小板是来源于巨噬细胞的无核片段,广泛分布于人体血液循环中,其在生理性止血与病理性血栓形成中均发挥着重要作用[1]。近年来的研究表明,血小板在免疫应答及炎症反应中同样有着极其重要的作用[2]。血小板在免疫方面的作用包括病原体的识别、影响内皮屏障功能和改变血管通透性、释放储存的炎症因子、与白细胞相互作用并进行信号传导以及通过表面受体进行免疫调节[3,4]。近年来,针对血小板表面受体调节免疫信号的研究取得了明显进展,相关受体包括Toll样受体(TLR)、血小板糖蛋白Ⅵ(GPⅥ)、血小板Fc受体FcγRⅡA、钙离子依赖型凝集素样受体-2(CLEC-2)、血小板内皮黏附分子-1(PECAM-1)、癌胚抗原相关黏附分子-1(CEACAM-1)和髓样细胞触发受体样转录因子-1(TLT-1)等[5]。其中血小板表面受体FcγRⅡA是一种对单体免疫球蛋白(Ig)G具有低亲和力而对含IgG免疫复合物具有高亲和力的受体,无论是IgG单体还是免疫复合物中的IgG都通过Fc片段与FcγRⅡA结合。此外,FcγRⅡA也广泛分布在于巨噬细胞、中性粒细胞、部分树突细胞及其他细胞[6],在血小板介导的各类免疫反应中发挥着重要作用。

关键词：人体血液循环 FcγR 免疫复合物血管通透性巨噬细胞免疫学功能癌胚抗原树突细胞

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靶向树突状细胞的脓毒症免疫调理新策略

中华烧伤与创面修复杂志 2023年第7期39卷 606-611页

作者：姚咏明张卉吴瑶解放军总医院医学创新研究部转化医学研究中心、第四医学中心北京100853

树突状细胞是介导机体天然免疫和获得性免疫应答的主要抗原提呈细胞。脓毒症状态下,树突状细胞数目减少,抗原提呈能力减弱,分泌细胞因子异常,造成T淋巴细胞活化障碍。既往研究提示,树突状细胞数目和功能变化是导致免疫功能抑制的主要原... 详细信息

树突状细胞是介导机体天然免疫和获得性免疫应答的主要抗原提呈细胞。脓毒症状态下,树突状细胞数目减少,抗原提呈能力减弱,分泌细胞因子异常,造成T淋巴细胞活化障碍。既往研究提示,树突状细胞数目和功能变化是导致免疫功能抑制的主要原因之一。笔者针对脓毒症时树突状细胞的变化特点,结合其目前的研究进展,简要分析并提出了靶向树突状细胞凋亡、分化和功能等方面的免疫调理新策略,以期为严重烧创伤并发脓毒症的有效防治提供新思路。

关键词：脓毒症免疫,细胞树突细胞免疫反应免疫调理干预策略

耐受性树突状细胞参与重建神经免疫性疾病中的T细胞平衡

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中华神经科杂志 2023年第6期56卷 714-720页

作者：李若雨李慧刘洪波郑州大学第一附属医院神经内科郑州450052

树突状细胞是人体最强大的抗原提呈细胞,参与多发性硬化、视神经脊髓炎以及重症肌无力等多种神经免疫性疾病的发生和发展。近年来,具有免疫耐受特性的树突状细胞正逐渐成为神经免疫性疾病的研究热点和治疗靶点。它们通过诱导效应T细胞... 详细信息

树突状细胞是人体最强大的抗原提呈细胞,参与多发性硬化、视神经脊髓炎以及重症肌无力等多种神经免疫性疾病的发生和发展。近年来,具有免疫耐受特性的树突状细胞正逐渐成为神经免疫性疾病的研究热点和治疗靶点。它们通过诱导效应T细胞的无能和缺失,促进抗原特异性调节性T细胞的产生来重建T细胞平衡,最终达到维持免疫耐受的目的。文中从耐受性树突状细胞的关键免疫靶点出发,详细分析了神经免疫背景下耐受性树突状细胞重建T细胞平衡的主要机制,并总结了神经免疫性疾病中耐受性树突状细胞疗法相关的研究进展。

关键词：树突细胞 T淋巴细胞多发性硬化视神经脊髓炎重症肌无力神经系统自身免疫疾病

序列相似性家族134成员B介导的内质网自噬对内毒素/脂多糖诱导的小鼠树突状细胞凋亡的影响

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中华烧伤与创面修复杂志 2023年第9期39卷 857-866页

作者：段昱姚人骐郑丽玉董宁吴瑶姚咏明戴新贵南方医科大学附属郴州医院(郴州市第一人民医院)重症医学科郴州423000 解放军总医院医学创新研究部转化医学研究中心、第四医学中心北京100853

目的探讨序列相似性家族134成员B(FAM134B)介导的内质网自噬对内毒素/脂多糖(LPS)诱导的小鼠树突状细胞(DC)凋亡的影响,为改善创面感染等引起的脓毒症免疫抑制提供依据。方法采用实验研究方法。取第3~10代对数生长期的小鼠DC系DC2.4进... 详细信息

目的探讨序列相似性家族134成员B(FAM134B)介导的内质网自噬对内毒素/脂多糖(LPS)诱导的小鼠树突状细胞(DC)凋亡的影响,为改善创面感染等引起的脓毒症免疫抑制提供依据。方法采用实验研究方法。取第3~10代对数生长期的小鼠DC系DC2.4进行实验。将DC分为LPS刺激0 h(不刺激)组、LPS刺激6 h组、LPS刺激12 h组、LPS刺激24 h组和LPS刺激72 h组,采用1μg/mL LPS(浓度下同)培养相应时间后,采用蛋白质印迹法检测FAM134B、微管相关蛋白1轻链3B(LC3B)以及转运蛋白SEC61B蛋白表达,并计算LC3B-Ⅱ/LC3B-Ⅰ比值(样本数为3)。将DC分为进行相应处理的磷酸盐缓冲液(PBS)组与LPS组,培养24 h,采用免疫荧光法检测FAM134B表达情况及其分别与溶酶体探针、LC3B共定位情况,通过透射电子显微镜观察细胞内自噬溶酶体数量。将DC分为转染含FAM134B基因小干扰RNA序列的慢病毒的敲减FAM134B组与转染空载慢病毒的空载体组,转染后72 h,于倒置荧光相差显微镜下观察细胞荧光表达情况,另将仅常规培养的DC设为空白对照组并于相应时间点行相同观察。将DC分为单纯PBS组、单纯LPS组,将成功转染含FAM134B基因小干扰RNA序列的慢病毒的DC分为敲减FAM134B+PBS组、敲减FAM134B+LPS组,将成功转染空载慢病毒的DC分为空载体+PBS组、空载体+LPS组,给予相应刺激并培养24 h,采用蛋白质印迹法检测FAM134B蛋白表达(样本数为3),通过流式细胞术检测细胞凋亡率(样本数为3),行Hoechst染色观测细胞凋亡情况并计算凋亡率(样本数为5),采用蛋白质印迹法检测剪切型胱天蛋白酶3(caspase-3)、B细胞淋巴瘤2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)蛋白表达并计算Bax/Bcl-2比值(样本数为5)。对数据行单因素方差分析、LSD检验、析因设计方差分析。结果与LPS刺激0 h组相比,LPS刺激12 h组和LPS刺激24 h组细胞中FAM134B蛋白表达均明显升高(P细胞中SEC61B蛋白表达均明显降低(P细胞中LC3B-Ⅱ/LC3B-Ⅰ比值均明显升高(P细胞中3个蛋白的变化最显著,将24 h作为后续LPS刺激时长。培养24 h,与PBS组相比,LPS组细胞中FAM134B的表达及其与LC3B及溶酶体探针的共定位均显著增强,自噬溶酶体数量明显增多。空载体组与敲减FAM134B组细胞转染后72 h均表现出高强度荧光,而空白对照组细胞在相应时间点无荧光表现。培养24 h,敲减FAM134B+PBS组细胞中FAM134B蛋白表达较单纯PBS组和空载体+PBS组明显降低(P值均细胞中FAM134B蛋白表达较单纯LPS组和空载体+LPS组显著降低(P值均细胞中FAM134B蛋白表达较单纯PBS组明显升高(P细胞中FAM134B蛋白表达较空载体+PBS组明显升高(P细胞术检测显示,单纯PBS组、单纯LPS组、空载体+PBS组、空载体+LPS组、敲减FAM134B+PBS组与敲减FAM134B+LPS组细胞凋亡率分别为(13.3±0.8)%、(32.6±4.3)%、(17.0±1.5)%、(51.7±3.3)%、(52.4±3.1)%与(62.3±2.6)%。培养24 h,与单纯LPS组和空载体+LPS组相比,敲减FAM134B+LPS组经流式细胞术与Hoechst染色检测的细胞凋亡率以及细胞中剪切型caspase-3蛋白表达、Bax/Bcl-2比值均明显升高(P细胞术与Hoechst染色检测的细胞凋亡率以及细胞中剪切型caspase-3蛋白表达、Bax/Bcl-2比值均明显升高(P细胞凋亡具有显著抑制效应。

关键词：脓毒症树突细胞细胞凋亡序列相似性家族134成员B 内质网自噬免疫功能障碍

0.05%环孢素滴眼液(Ⅱ)对中重度干眼患者角膜神经的影响

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国际眼科杂志 2023年第4期23卷 682-688页

作者：余兰慧熊蕊艾丽珍古学军南昌大学附属眼科医院江西省眼科疾病临床医学研究中心江西省南昌市330006

目的:通过观察中重度干眼患者使用0.05%环孢素(CsA)滴眼液(Ⅱ)治疗前后角膜上皮下神经(SBN)数量及形态的改变,探讨国产CsA对干眼的治疗效果和对SBN的影响。方法:前瞻性研究。选取2020-12/2022-01来南昌大学附属眼科医院就诊的中重度干... 详细信息

目的:通过观察中重度干眼患者使用0.05%环孢素(CsA)滴眼液(Ⅱ)治疗前后角膜上皮下神经(SBN)数量及形态的改变,探讨国产CsA对干眼的治疗效果和对SBN的影响。方法:前瞻性研究。选取2020-12/2022-01来南昌大学附属眼科医院就诊的中重度干眼患者20例20眼,接受国产CsA治疗,完成3mo随访。分别于治疗前,治疗后3mo进行临床评估。观察临床症状、体征、SBN形态数量的变化。结果:治疗3mo后,眼表疾病指数(OSDI)量表评分、TBUT、SchirmerⅠ、CFS均得到显著改善。共聚焦显微镜数据分析显示,治疗3mo后,SBN密度由13.49±5.43mm/mm^(2)增加至14.93±5.34mm/mm^(2)(P树突细胞(DC)数量由5.83±3.28个/帧减少至3.67±2.24个/帧(P<0.001)。DC数量与分支神经数量、神经弯曲度评分、神经串珠结构数量呈正相关(r s=0.27,P=0.045;r s=0.407,P<0.01;r s=0.486,P<0.01)。结论:神经损伤与干眼引起的角膜炎症相关,而0.05%CsA滴眼液(Ⅱ)能有效抑制炎症,改善SBN形态和数量;通过共焦显微镜观察角膜SBN可以作为干眼治疗疗效评估的有效方法。

关键词：中重度干眼 0.05%环孢素滴眼液(Ⅱ) 角膜上皮下神经树突细胞

基于高加索人单细胞转录组的炎症性树突状表皮细胞的免疫代谢研究

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中华皮肤科杂志 2024年第4期57卷 343-349页

作者：赵迎高翠娥隋昕宋志强陆军军医大学西南医院皮肤科重庆400038

目的比较特应性皮炎患者与健康对照皮肤样本的单细胞转录组测序数据,探讨特应性皮炎皮损中炎症性树突状表皮细胞(IDEC)的免疫代谢特征。方法对既往发表的8例特应性皮炎患者和7例健康对照的单细胞测序数据进行深入挖掘,利用标记基因筛选... 详细信息

目的比较特应性皮炎患者与健康对照皮肤样本的单细胞转录组测序数据,探讨特应性皮炎皮损中炎症性树突状表皮细胞(IDEC)的免疫代谢特征。方法对既往发表的8例特应性皮炎患者和7例健康对照的单细胞测序数据进行深入挖掘,利用标记基因筛选出IDEC,获取两组IDEC的差异表达基因,并对差异表达基因进行京都基因组百科全书富集分析,使用Seurat中的“AddModuleScore”功能对两组IDEC的炎症通路和代谢通路进行评分,Mann-Whitney秩和检验进行统计分析;通过上述评分以及R语言中的“cor”和“cor.test”函数来评估IDEC的代谢通路与炎症通路之间的相关性。结果特应性皮炎患者皮损中大量浸润的IDEC高表达Th2趋化因子(CCL17)、抗原提呈相关基因(CD1B)、内皮生长相关基因(TYMP、AREG)、炎症相关基因(S100A8、S100A10、LGALS1)、基质纤维化相关基因(MMP12、ADAM19)、代谢相关基因(乳酸脱氢酶、脂肪酶A、谷氨酰胺合成酶)、危险信号传导相关基因(HSPA1B、HSP90AA1、HSPB1、HSPH1)。特应性皮炎患者IDEC的葡萄糖能量代谢、糖酵解代谢、核苷酸代谢、谷氨酸和谷氨酰胺代谢、氨基酸代谢活性显著上调,并且与Th2炎症水平呈正相关;氧化磷酸化和脂代谢活性显著下调,其中脂代谢活性与Th2炎症水平呈负相关。谷氨酰胺代谢和葡萄糖能量代谢活性与Th22炎症水平呈正相关;Th1炎症水平和Th17炎症水平与磷酸戊糖代谢、核苷酸代谢、糖酵解代谢和氨基酸代谢等活性呈负相关。结论特应性皮炎患者皮损中IDEC的炎症和代谢相关基因调节异常,多条代谢通路显著上调,其中糖酵解代谢活性与Th2炎症水平相关性最强。

关键词：皮炎,特应性树突细胞上皮细胞转录组炎症性树突状表皮细胞单细胞转录组测序免疫代谢

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脓毒症中树突状细胞免疫功能障碍研究进展

中华烧伤杂志 2020年第2期36卷 150-155页

作者：费翔盛志勇姚咏明解放军总医院第四医学中心创伤研究中心北京100048

脓毒症是机体对感染反应失调所致危及生命的器官功能障碍,进一步发展则常导致脓毒症休克甚至死亡。既往许多研究关注脓毒症状态下单核/巨噬细胞、中性粒细胞、补体系统、细胞因子炎症反应等异常改变。近年来的资料提示,树突状细胞作为... 详细信息

脓毒症是机体对感染反应失调所致危及生命的器官功能障碍,进一步发展则常导致脓毒症休克甚至死亡。既往许多研究关注脓毒症状态下单核/巨噬细胞、中性粒细胞、补体系统、细胞因子炎症反应等异常改变。近年来的资料提示,树突状细胞作为机体天然免疫系统最为强大的抗原提呈细胞,在脓毒症免疫紊乱过程中发挥重要作用。本文中,笔者通过对树突状细胞主要分类、免疫功能、监测方法、调控途径及其在脓毒症免疫障碍中的临床意义进行综述,旨在为脓毒症免疫调节寻求新的策略。

关键词：脓毒症树突细胞免疫

多房棘球蚴分泌物抗原对脂多糖诱导小鼠骨髓来源的树突状细胞表型及功能的影响

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临床肝胆病杂志 2022年第3期38卷 606-612页

作者：李文登李超群胡旺徐凯庞明泉乜茹冯浩杰张占红刘处处樊海宁青海大学附属医院肝胆胰外科青海省包虫病重点实验室西宁810000

目的探究不同浓度多房棘球蚴分泌物抗原(Em-sAg)对脂多糖(LPS)诱导小鼠骨髓来源的树突状细胞(BMDC)表型和功能的影响。方法小鼠骨髓腔中所分离的骨髓前体细胞,经小鼠重组粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)刺激后形成BMDC,于正倒置显... 详细信息

目的探究不同浓度多房棘球蚴分泌物抗原(Em-sAg)对脂多糖(LPS)诱导小鼠骨髓来源的树突状细胞(BMDC)表型和功能的影响。方法小鼠骨髓腔中所分离的骨髓前体细胞,经小鼠重组粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)刺激后形成BMDC,于正倒置显微镜下观察细胞形态。用流式细胞术鉴定BMDC纯度后,分为Control组、阳性对照组(LPS 1μg/mL)、LPS+3 mg/mL Em-sAg组、LPS+1.5 mg/mL Em-sAg组、LPS+0.75 mg/mL Em-sAg组、LPS+0.375 mg/mL Em-sAg组共6组。流式细胞术检测各组BMDC表面分子(CD80、CD86、MHC-Ⅱ分子)的表达情况,ELISA法检测各组细胞因子IL-12p70的表达水平。满足正态分布的计量资料多组间比较采用单因素方差分析,组间两两比较采用LSD-t检验表示。结果在正倒置显微镜下观察到,培养8~10 d的细胞可见毛刺样突起,细胞呈完全悬浮状态。流式细胞术检测发现,CD11c的阳性率均在70%以上,据此鉴定所培养的细胞大部分为BMDC。流式细胞术的进一步结果表明,与Control组相比,LPS组表面的细胞分子CD80、CD86、MHC-Ⅱ均显著增加(P值均0.05)。ELISA法的结果表明,不同组间的IL-12 p70的水平差异均有统计学意义(F=73.140,P细胞因子IL-12p70的表达。

关键词：棘球蚴病,肝树突细胞脂多糖类免疫耐受