多房棘球绦虫apomucin基因qPCR引物的筛选及潜在应用

作     者：苏梦 郭小腊 杨静 邵忠伟 丁军涛 项海涛 骆学农 郑亚东 孙晓林 

作者机构：甘肃农业大学动物医学院兰州730070 中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室甘肃动物寄生虫病重点实验室兰州730046 新疆大学生命科学与技术学院乌鲁木齐830046 江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心扬州225009 

出 版 物：《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》 (Chinese Journal of Parasitology and Parasitic Diseases)

年 卷 期：2016年第34卷第5期

页      面：394-398页

核心收录：

学科分类：1002[医学-临床医学] 1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 100103[医学-病原生物学] 10[医学] 

基　　金：国家自然科学基金(No.31460659)~~ 

主　　题：多房棘球绦虫 apomucin基因 qPCR 阿苯达唑 胰岛素 

摘      要：目的 筛选多房棘球绦虫（Echinococcus multilocularis）apomucin基因（Em-apo）的qPCR最佳引物，探索该基因的表达水平。 方法 根据GeneDB中4种Em-apo序列，设计引物并通过荧光定量PCR（qPCR）对引物进行分析，确定每对引物的特异性、PCR扩增效率。利用筛选得到的最佳引物，分别检测经阿苯达唑（5 μg/ml）和胰岛素（100 ng/ml）培养处理的多房棘球绦虫原头节（1 000个）Em-apo表达水平的变化，用稀释阿苯达唑的DMSO和胰岛素的PBS作为各自的对照。 结果 筛选分别得到了Em-apo-1、Em-apo-2/3、Em-apo-4和内参基因actin的特异引物各1对，qPCR熔解曲线分析结果显示，每对引物的扩增产物只出现单峰，且扩增效率均为95%～101%。qPCR分析结果显示，与DMSO对照组（1.00）相比，多房棘球绦虫原头节经阿苯达唑处理后，Em-apo-1、Em-apo-2/3和Em-apo-4的表达水平均有所上升，分别为1.51±0.27、1.39±0.30和1.14±0.18，三者差异无统计学意义（P〉0.05）；与PBS对照组（1.00）相比，原头节经胰岛素处理后，Em-apo表达水平的变化不一，其中Em-apo-1的表达水平基本不变，Em-apo-4的表达水平有所下降，而Em-apo-2/3明显下调（0.73±0.09），但三者差异无统计学意义（P〉0.05）。 结论 本实验筛选确定的Em-apo基因的qPCR引物特异，可用于Em-apo基因表达水平的检测。多房棘球绦虫原头节经阿苯达唑和胰岛素处理后，对Em-apo-1、Em-apo-2/3和Em-apo-4的表达水平有一定的影响。