变溶菌素(Mutanolysin)酶解单核细胞增多性李斯特菌细胞壁条件的优化

作     者：丁剑 曹树珠 陈朔 马勋 DING Jian;CAO Shuzhu;CHEN Shuo;MA Xun

作者机构：石河子大学动物科技学院预防兽医学重点实验室新疆石河子832003 

出 版 物：《石河子大学学报（自然科学版）》 (Journal of Shihezi University(Natural Science))

年 卷 期：2016年第34卷第4期

页      面：436-439页

学科分类：1007[医学-药学(可授医学、理学学位)] 090601[农学-基础兽医学] 100705[医学-微生物与生化药学] 1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 09[农学] 0906[农学-兽医学] 100103[医学-病原生物学] 10[医学] 

基　　金：国家自然科学基金项目(31160506) 

主　　题：LM90SB2 原生质体 制备 变溶菌素 

摘      要：为了最大效率提取单核细胞增多性李斯特菌LB90SB2细胞壁表面蛋白,本研究对变溶菌素浓度和酶解时间进行了优化。选择20、60μg/m L的变溶菌素浓度进行30 min-4 h,37℃酶解以及37和4℃低温联合酶解,通过测定酶解前后OD600和CFU,判断细胞膜完整性和计算原生质体形成率,筛选最佳酶解浓度和酶解时间。在最佳酶浓度的条件下,测定不同酶解时间细胞壁蛋白提取物浓度。结果表明:在酶解30 min-4 h,原生质体形成率从0提高至91.00%,细胞壁蛋白浓度从0.272增加至1.735 mg/m L。△OD600在1.86%-14.50%变动,但△OD600的统计学处理差异不显著。60μg/m L变溶菌素作用4 h的原生质体形成率达到91.00%,远高于20μg/m L变溶菌素作用4 h的78%。最终确定变溶菌素浓度为60μg/m L,酶解时间4 h为酶解LM90SB2细胞壁的最佳条件。本研究为下一步研究细胞壁表面蛋白奠定基础。