Ⅰ型HEV ORF3-pEGFPN1真核表达质粒的构建与鉴定

作     者：刘曦 田德英 章述军 贾昱娴 

作者机构：华中科技大学同济医学院附属同济医院感染科湖北武汉430030 

出 版 物：《中西医结合肝病杂志》 (Chinese Journal of Integrated Traditional and Western Medicine on Liver Diseases)

年 卷 期：2009年第19卷第3期

页      面：151-153页

学科分类：1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 10[医学] 

基　　金：湖北省科技攻关项目(No.2007AA301B26) 武汉市科技攻关项目(No.200761023424) 

主　　题：肝炎病毒 戊型 真核表达 融合蛋白 

摘      要：目的:构建表达Ⅰ型HEV ORF3-pEGFPN1融合蛋白的真核表达载体;获得重组质粒稳定转染的LO2细胞系。方法:从猕猴胆汁提取RNA,利用RT-PCR及PCR技术从HEV基因组中扩增出ORF3基因片断,EcoRⅠ/BamHⅠ双酶切后连接到经同样酶切的pEGFPN1真核表达载体,转化DH5a菌株感受细胞,获得阳性重组质粒ORF3-pEGFPN1。将阳性克隆用脂质体法转染LO2细胞系,G418筛选抗性克隆,SDS-PAGE、Western blot分析鉴定ORF3-pEGFPN1融合蛋白的表达。结果:真核表达质粒转染LO2细胞,SDS-PAGE显示在39.8kD左右蛋白表达量明显高于对照组,Western blot在39.8kD左右有一条强的棕色条带。结论:成功构建ORF3-pEGFPN1真核表达质粒,能在LO2细胞表达融合蛋白,为进一步研究该蛋白生物学功能奠定基础。