猪带绦虫丝氨酸蛋白酶抑制剂B6基因的鉴定、表达及抗原性分析

作     者：刘光学 张少华 郭爱疆 侯俊玲 魏艳玲 王帅 骆学农 LIU Guang-xue;ZHANG Shao-hua;GUO Ai-jiang;HOU Jun-ling;WEI Yan-ling;WANG Shuai;LUO Xue-nong

作者机构：中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室甘肃省动物寄生虫病重点实验室兰州730046 江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心扬州225009 

出 版 物：《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》 (Chinese Journal of Parasitology and Parasitic Diseases)

年 卷 期：2016年第34卷第4期

页      面：334-338,345页

核心收录：

学科分类：1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 100103[医学-病原生物学] 10[医学] 

基　　金：国家自然科学基金(No.31372433)~~ 

主　　题：猪带绦虫 Tsserpin B6 鉴定 表达 抗原性分析 

摘      要：目的鉴定、表达猪带绦虫(Taenia solium)丝氨酸蛋白酶抑制剂(Tsserpin B6),探索其作为诊断抗原的可行性。方法利用猪带绦虫基因组和转录组数据设计Tsserpin B6特异引物,RT-PCR扩增获得Tsserpin B6基因,对其DNA、氨基酸序列进行生物信息学分析,利用Clustal X1.83进行序列比对,并用MEGA6.0进行系统进化分析。构建pET-30a-Tsserpin B6重组表达载体,在大肠埃希菌(Escherichia coli)BL21(DE3)中诱导表达。纯化表达的蛋白进行十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE),用猪囊尾蚴阳性血清进行蛋白质印迹(Western blotting)鉴定。结果Tsserpin B6开放阅读框为1 131 bp,编码376个氨基酸。其编码的氨基酸序列具有serpin较为保守的反应中心环和特征性结构域(NEEGAE和FTVDHPFLF),存在9个潜在的线性B淋巴细胞抗原表位。Tsserpin B6的表达产物相对分子质量(M_r)为53 000,主要以包涵体形式存在。Western blotting检测结果显示,所表达的蛋白可与猪囊尾蚴阳性血清发生特异性反应,在M_r 53 000处产生特异条带。结论克隆了Tsserpin B6基因,其表达产物能被猪囊尾蚴阳性血清所识别。