PEP-1介导的重组肝细胞核因子4α蛋白转导对肝癌细胞的抑制作用

作     者：邓龙飞 丁晨虹 谢渭芬 张新 DENG Long-fei;DING Chen-hong;XIE Wei-fen;ZHANG Xin

作者机构：华东理工大学生物工程学院上海200237 第二军医大学长征医院消化内科上海200003 

出 版 物：《第二军医大学学报》 (Academic Journal of Second Military Medical University)

年 卷 期：2015年第36卷第9期

页      面：929-935页

核心收录：

学科分类：1002[医学-临床医学] 100214[医学-肿瘤学] 10[医学] 

基　　金：国家自然科学基金(81372675) 国家科技重大专项(2013ZX10002007-007)~~ 

主　　题：肝细胞癌 肝细胞核因子4α 细胞穿膜肽 PEP-1 

摘      要：目的利用细胞穿膜肽PEP-1介导重组肝细胞核因子4α(HNF4α)蛋白进入肝癌细胞,并明确外源融合蛋白PHNF4α对肝癌细胞的作用。方法构建表达质粒pET28a-P-HNF4α,优化原核表达体系的诱导条件,经大量表达、亲和层析纯化及浓缩、透析后获得纯度较高的带有细胞穿膜肽PEP-1的融合蛋白P-HNF4α;P-HNF4α转导人肝癌细胞,蛋白质印迹法检测其穿膜效率,核质分离和细胞免疫荧光检测P-HNF4α的亚细胞定位,Real-time PCR检测肝癌细胞基因表达,CCK-8法检测肝癌细胞增殖,细胞划痕实验及小室侵袭实验检测P-HNF4α对肝癌细胞转移能力的影响。结果细胞穿膜肽PEP-1成功介导融合蛋白P-HNF4α进入Huh7细胞并定位于细胞核;P-HNF4α蛋白可促进Huh7细胞肝功能基因表达,抑制干细胞相关基因表达(P0.05或0.01),并显著抑制肝癌细胞增殖(P0.05)、迁移(P0.001)和侵袭(P0.05)能力。结论 P-HNF4α可诱导肝癌细胞向成熟肝细胞分化,降低肝癌细胞的恶性程度,是诱导分化治疗肝癌的潜在手段。