新型人上皮性卵巢癌细胞HO8910靶向输送系统的构建及其生物学活性的鉴定

作     者：廖花 康佳丽 蒋文燕 王小霞 钟嘉莉 周聪 LIAO Hua;KANG Jiali;JIANG Wenyan;WANG Xiaoxia;ZHONG Jiali;ZHOU Cong

作者机构：广州医科大学附属广州市第一人民医院妇产科广州510180 

出 版 物：《临床肿瘤学杂志》 (Chinese Clinical Oncology)

年 卷 期：2014年第19卷第10期

页      面：865-870页

学科分类：1002[医学-临床医学] 1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 100102[医学-免疫学] 100214[医学-肿瘤学] 10[医学] 

基　　金：广东省自然科学基金资助项目(S2012010009341) 

主　　题：TAT-OSBP-EGFP 融合蛋白 卵巢癌 靶向输送系统 

摘      要：目的构建新型人卵巢癌HO8910细胞株靶向输送系统TAT-OSBP-EGFP,并对其靶向输送特性和体外活性进行研究鉴定。方法采用PGEX-6P-3质粒分别构建TAT-EGFP、OSBP-EGFP和TAT-OSBP-EGFP表达载体,重组质粒转化BL21(DE3)大肠杆菌,经IPTG诱导表达和GST SefinoseTMResin柱亲和层析纯化后,采用SDS-PAGE和Western blotting鉴定。流式细胞术分析不同浓度(0、1、5、10μmol/L)TAT-EGFP、OSBP-EGFP和TAT-OSBP-EGFP融合蛋白处理HO8910细胞2h后的细胞穿膜率,细胞免疫荧光法检测3种融合蛋白对HO8910的输送特性(以人结肠癌Lo Vo细胞作对比),CCK-8法检测0、1、5、10、15、40、60、80、100μmol/L TAT-OSBP-EGFP处理HO8910细胞2h后的细胞活性。结果成功构建TAT-OSBP-EGFP原核表达载体,并获得可溶性融合蛋白。与TAT-EGFP相比,当浓度为10μmol/L时,TAT-OSBP-EGFP处理后HO8910细胞的穿膜率无明显升高(P0.05);但当浓度为1、5μmol/L时,TAT-OSBP-EGFP处理后HO8910细胞的穿膜率升高,差异有统计学意义(P0.05)。结论成功构建针对人卵巢癌HO8910细胞株的靶向输送系统,为下一步肿瘤靶向药物输送载体的构建并发挥肿瘤的靶向杀灭作用打下了良好的基础。