糖基化磷脂酰肌醇锚定型EGFP真核表达质粒的构建及表达

作     者：郭荫广 陈全 朱大冕 Guo Yinguang;Chen Quan;Zhu Damian

作者机构：重庆医科大学分子医学与肿瘤研究中心重庆400016 重庆医科大学基础医学院免疫学教研室重庆400016 

出 版 物：《生物技术通报》 (Biotechnology Bulletin)

年 卷 期：2009年第25卷第11期

页      面：89-91,97页

学科分类：0710[理学-生物学] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 071007[理学-遗传学] 0901[农学-作物学] 0836[工学-生物工程] 090102[农学-作物遗传育种] 

主　　题：GPI 真核表达载体 A549 绿色荧光蛋白 

摘      要：构建与增强型绿色荧光蛋白基因相连的糖基化磷脂酰肌醇(glycosyl phosphatidylinositol,GPI)序列的真核表达质粒,并检测其在A549细胞中的表达。分离人外周血淋巴细胞,提取总RNA,以RT-PCR法扩增CD24基因的243bpGPI锚定序列,双酶切后定向克隆入pEGFP-C1质粒中,构建并鉴定pEGFP-C1-GPI质粒。经脂质体介导转染A549细胞后,在荧光显微镜下观察目的蛋白在真核细胞内的表达情况。经酶切和测序鉴定证实,所克隆的CD24GPI序列正确,荧光显微镜观察pEGFP-C1-GPI质粒转染A549细胞可见围绕细胞膜的强绿色荧光,而对照pEGFP-C1质粒转染A549细胞仅见胞内均匀荧光。成功构建与EGFP相连的GPI真核表达质粒,且能在A549细胞膜上锚定表达EGFP-GPI融合蛋白,为构建锚定表达型肿瘤疫苗奠定基础。