黄孢原毛平革菌乙醇脱氢酶基因的克隆和表达

作     者：何川 吴近名 张希根 吴波 张义正 HE Chuan;WU Jin-Ming;ZHANG Xi-Gen;WU Bo;ZHANG Yi-Zheng

作者机构：四川大学生命科学学院四川省分子生物学和生物技术重点实验室成都610064 

出 版 物：《遗传》 (Hereditas（Beijing))

年 卷 期：2009年第31卷第5期

页      面：546-551页

核心收录：

学科分类：07[理学] 08[工学] 09[农学] 071007[理学-遗传学] 071005[理学-微生物学] 090102[农学-作物遗传育种] 0710[理学-生物学] 1007[医学-药学(可授医学、理学学位)] 100705[医学-微生物与生化药学] 1002[医学-临床医学] 0901[农学-作物学] 0836[工学-生物工程] 10[医学] 

基　　金：国家自然科学基金资助项目(编号:30470984)资助 

主　　题：黄孢原毛平革菌 乙醇脱氢酶 基因克隆 基因表达 RT-PCR 蛋白质印迹 

摘      要：乙醇是黄孢原毛平革菌(Phanerochaete chrysosporium)在限氧培养条件下重要的代谢物之一,为了更好的理解***在低氧条件下的代谢机制,文章从***中克隆到一个长1071 bp的乙醇脱氢酶基因PCAdh1 cDNA,该基因编码一个由356个氨基酸组成的蛋白质,它与其他生物的乙醇脱氢酶的氨基酸序列的相似性很低,但酶催化活性位点序列却高度保守。将PCAdh1在大肠杆菌中表达,并获得有酶活性的重组蛋白。纯化的蛋白质用于制备抗体。半定量RT-PCR和Western blot分析结果显示,在限氧条件的培养过程中,PCAdh1基因在mRNA水平和蛋白水平上都保持相对稳定,表明该基因的表达是组成型的;但从菌丝体提取的粗蛋白中的乙醇脱氢酶活性却随着培养时间的增加及氧气含量的持续降低而逐渐升高,这暗示***-rium中存在其他低氧诱导型乙醇脱氢酶基因的表达。