人源性抗HBsAg Fab抗体的发酵生产研究

作     者：邓宁 向军俭 陈文吟 熊盛 王珣章 粟宽源 DENG Ning 1 XIANG Jun Jian 1 CHEN Wen Yin 2 XIONG Sheng 3 WANG Xun Zhang 4* SU Kuan Yuan 2 1(Life Science and Technology College in Jinan University, Guangzhou 510632,China) 2(The Central Research Institute, 458th Hospital of PLA, Guangzhou 510602, China) 3(Pharmaceutical Science College in Jinan University, Guangzhou 510632, China) 4(The State Key Laboratory of Bio control in Zhongshan University, Guangzhou 510275, China)

作者机构：暨南大学生命科学技术学院广州510632 解放军第458医院传染病研究中心广州510602 暨南大学药学院广州510632 中山大学生物防治国家重点实验室生物医药中心广州510175 

出 版 物：《生物工程学报》 (Chinese Journal of Biotechnology)

年 卷 期：2004年第20卷第5期

页      面：800-804页

核心收录：

学科分类：1007[医学-药学(可授医学、理学学位)] 100705[医学-微生物与生化药学] 10[医学] 

基　　金：广州市科技局重点项目 (No .2 0 0 3J1 C0 171) 国家自然科学基金项目 (No .40 3 760 3 0) ~~ 

主　　题：乙型肝炎病毒 HBsAgFab 抗体 发酵 毕赤酵母 生物制品 表面抗原 

摘      要：为了适应工业生产的需要 ,利用fed batch方法 ,重组人源性抗HBsAgFab抗体酵母工程菌在 30L发酵罐中进行了高密度发酵 ,发酵最适温度 30℃ ,pH值范围 5 0～ 5 3,溶氧范围 2 0 %～ 30 %。发酵液OD6 0 0 值达到 30 0时开始诱导 ,甲醇最佳诱导浓度为 1 0mL L。重组人源性抗HBsAgFab抗体经离子交换层析纯化 ,纯化产品经SDS PAGE、Westernblot进行分析和ELISA方法进行活性测定。结果显示 ,重组Fab抗体在Fed batch发酵系统中可高效表达 ,经过 1 92h的发酵生产 ,重组人源性抗HBsAgFab抗体的表达量可达 4 1 2mg L。发酵上清经过离子交换层析纯化 ,获得纯度为 95 %的重组Fab抗体 ,该Fab抗体经ELISA分析具有较高的HBsAg抗原亲和力和特异性。结果证实可以通过高密度发酵毕赤酵母工程菌来高效生产重组人源性抗HBsAgFab抗体 ,为后续的工业化生产应用奠定了基础。