酪蛋白抗凝血肽的制备及其体外抗凝血、溶栓作用研究

作     者：苗艳丽 刘卓勤 孙瑞雄 李卫东 廖艳 陈绍红 MIAO Yan-li;LIU Zhuo-qin;SUN Rui-xiong;LI Wei-dong;LIAO Yan;CHEN Shao-hong

作者机构：广东海洋大学理学院广东湛江524088 广东海洋大学现代生物化学中心广东湛江524088 

出 版 物：《中草药》 (Chinese Traditional and Herbal Drugs)

年 卷 期：2016年第47卷第11期

页      面：1875-1881页

核心收录：

学科分类：1007[医学-药学(可授医学、理学学位)] 0832[工学-食品科学与工程（可授工学、农学学位）] 08[工学] 083203[工学-农产品加工及贮藏工程] 10[医学] 

基　　金：广东省湛江市科技计划项目(2013B01073) 广西科学研究与计划开发项目(桂科合14125008-1-10) 广东海洋大学创新强校项目(GDOU2015050209) 广东省教育厅2015年重点平台及科研项目(2015KTSCX057) 

主　　题：抗凝血肽 酪蛋白 抗凝血 溶栓 木瓜蛋白酶 菠萝蛋白酶 中性蛋白酶 碱性蛋白酶 凝血酶 高效体积排阻色谱 马尿酰-组氨酰-亮氨酸 

摘      要：目的研究抗凝血肽的制备、分离方法及其体外抗凝血、溶栓效果。方法用木瓜蛋白酶、菠萝蛋白酶、中性蛋白酶和碱性蛋白酶对酪蛋白进行4酶混合水解制备抗凝血肽,以固定化凝血酶对抗凝血肽进行萃取,用新西兰兔进行体外抗凝血、溶栓实验。结果实验确定的抗凝血肽制备条件为酪蛋白质量浓度15%,水解每克酪蛋白的木瓜蛋白酶、菠萝蛋白酶、中性蛋白酶和碱性蛋白酶用量分别为1 500、2 400、1 000、1 250 U,水解温度50℃,pH 7.0,水解时间4 h。固定化凝血酶萃取抗凝血肽的初始浓度6 ATU/mL,萃取温度30℃,pH 5.0,萃取时间30 min。反萃取温度30℃,pH 7.6,反萃取时间40 min。抗凝血肽经高效体积排阻色谱分析,主要成分分子大小与马尿酰-组氨酰-亮氨酸相当。体外抗凝血时间超72 h,溶栓时间24 h。结论酪蛋白抗凝血肽主要成分为3肽,体外抗凝血及溶栓实验效果良好。