人类抗凋亡基因bcl-xL的克隆及其在大鼠心肌细胞内的高效表达

作     者：廖洪映 张惠忠 陈波 华平 殷香保 蒙荣森 刘启才 熊利华 

作者机构：中山大学附属第二医院心胸外科广东广州510120 中山大学附属第二医院医学研究中心广东广州510120 广州医学院医学研究中心广东广州510182 

出 版 物：《中山大学学报（医学科学版）》 (Journal of Sun Yat-Sen University:Medical Sciences)

年 卷 期：2005年第26卷第B3期

页      面：50-53页

核心收录：

学科分类：1003[医学-口腔医学] 1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 100104[医学-病理学与病理生理学] 10[医学] 

基　　金：卫生部科研基金(981093) 

主　　题：基因,bcl-xL 克隆 载体构建 心肌细胞 基因疗法 

摘      要：【目的】克隆人类抗凋亡基因 bcl-xL cDNA,构建两种不同的真核表达载体,评价大鼠心肌细胞表达外源性bcl-xL 的效果,并比较不同转染方法对 bcl-xL 表达的影响。【方法]】RT-PCR 法从人肝脏组织获取 bcl-xL cDNA,连接至pTargeT^(TM)载体,并亚克隆至真核表达载体 pEGFP-C1上;细菌内同源重组构建重组腺病毒质粒,腺病毒纯化试剂盒获取高滴度的重组腺病毒;脂质体和腺病毒介导分别转染体外培养的大鼠心肌细胞,荧光显微镜观察转染效率,RT-PCR 和免疫细胞化学染色法检测 bcl-xL mRNA 和 bcl-xL 蛋白的表达。【结果】获取的 bcl-xL cDNA 测序正确,成功克隆真核表达质粒 pEGFP-bcl-xL;病毒颗粒滴度高达5.3×10^(12)pfu/L;脂质体和腺病毒转染心肌细胞效率分别为40.3%和95.4%,转染后bcl-xL mRNA 和 bel-xL 蛋白的表达均增加,但两种方法之间差异有统计学意义(P0.01)。【结论】成功获取人类 bcl-xL基因并制备真核表达质粒和重组腺病毒,心肌细胞能高效表达外源性 bcl-xL,并以腺病毒介导更为理想。为 bcl-xL 基因治疗缺血性心脏病提供实验基础。