应用抑制性消减杂交技术筛选脂肪细胞分化相关基因

作     者：易晓青 肖延风 尹春燕 徐尔迪 YI Xiao-qing;XIAO Yan-feng;YIN Chun-yan;XU Er-di

作者机构：西安交通大学第二附属医院儿科陕西西安710004 

出 版 物：《浙江大学学报（医学版）》 (Journal of Zhejiang University(Medical Sciences))

年 卷 期：2012年第41卷第3期

页      面：267-273页

学科分类：1002[医学-临床医学] 1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 100101[医学-人体解剖与组织胚胎学] 10[医学] 

基　　金：国家自然科学基金(30771815) 

主　　题：肥胖症 基因文库 杂交,遗传 DNA,互补/遗传学 克隆,分子 细胞,培养的 细胞分化/遗传学 脂细胞/遗传学 

摘      要：目的:利用脂肪分化细胞模型筛选与脂肪细胞分化相关的差异性表达基因。方法:采用抑制性消减杂交技术,以诱导分化后的人前体脂肪细胞系SW872总RNA为Tester,诱导分化前的人前体脂肪细胞系SW872为Driver,将消减杂交获得的DNA片段与pGM-T载体连接,构建cDNA文库后,转化大肠杆菌DH5α,筛选阳性克隆。将获得的阳性克隆插入片段进行测序分析,并与GenBank数据库进行同源性分析,获得差异性表达基因。结果:扩增消减cDNA文库获得135个白色克隆,随机挑选64个进行测序,共获得34个阳性克隆基因。结论:本研究成功构建了脂肪细胞分化差异性表达基因的消减cDNA文库,筛选出了与脂肪细胞分化相关的差异表达基因。