香蕉束顶病毒海口分离物Rb蛋白的原核表达、纯化及多克隆抗血清制备

作     者：冯团诚 余乃通 刘志昕 Feng Tuancheng;Yu Naitong;Liu Zhixin

作者机构：中国热带农业科学院热带生物技术研究所农业部热带作物生物技术重点开放实验室海南海口571101 

出 版 物：《热带作物学报》 (Chinese Journal of Tropical Crops)

年 卷 期：2010年第31卷第8期

页      面：1239-1243页

核心收录：

学科分类：09[农学] 0904[农学-植物保护] 090401[农学-植物病理学] 

基　　金：国家科技支撑计划项目(No.2007BAD48B01) 教育部/海南省教育厅联合资助博士点基金项目(No.20050565002)资助 

主　　题：香蕉束顶病毒 Rb蛋白 原核表达 抗血清 间接ELISA 

摘      要：应用PCR方法从感染香蕉束顶病毒的香蕉植株幼嫩假茎和叶片总DNA中克隆了Rb(Rb-binding-like protein)基因的编码区,将其插入原核表达载体pET-28b中构建重组质粒pET28b-Rb。转化重组质粒的*** BL21(DE3)进行IPTG诱导表达,SDS-PAGE分析结果表明,表达产物大小为22.6ku,且主要以包涵体形式稳定表达。目的蛋白经Ni2+-NTA琼脂糖亲和层析纯化后免疫家兔并获得抗血清。Western blot检测结果表明,抗血清与诱导表达的BBTV编码Rb蛋白发生特异性反应。间接ELISA法测定的抗血清效价大于1:250000。用抗血清对感病香蕉和健康香蕉进行检测,结果表明,抗血清对感病香蕉有很高特异性,最佳工作浓度为1:1500。