大肠杆菌O157中肽聚糖水解酶MpaA的克隆、表达、纯化及晶体学研究

作     者：马银良 刘爽 崔亚琦 康现江 刘秀华 MA Yinliang;LIU Shuang;CUI Yaqi;KANG Xianjiang;LIU Xiuhua

作者机构：河北大学生命科学学院河北保定071002 

出 版 物：《河北大学学报（自然科学版）》 (Journal of Hebei University(Natural Science Edition))

年 卷 期：2016年第36卷第4期

页      面：412-416页

学科分类：0710[理学-生物学] 071010[理学-生物化学与分子生物学] 07[理学] 

基　　金：国家自然科学基金资助项目(31300056) 河北省自然科学基金资助项目(C2014201039) 河北省教育厅优秀青年基金资助项目(YQ2014007) 河北大学自然科学基金资助项目(2011-220) 

主　　题：大肠杆菌O157 肽聚糖水解酶 MpaA 晶体 

摘      要：采用分子克隆方法将来源于大肠杆菌O157的mpaA基因构建入pET-21b(+)表达载体.诱导MpaA蛋白在大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中高效表达,通过Ni亲和层析、离子交换层析和凝胶过滤层析三步法纯化得到高纯度蛋白.使用气象扩散法进行蛋白质晶体生长的初步筛选与优化,得到MpaA蛋白质单晶,并使用X射线衍射仪进行衍射数据的收集与处理.MpaA晶体分辨率为0.26nm,属于P31空间群,晶胞参数为a=5.989 3nm,b=5.989 3nm,c=12.987 0nm,β=90.000°.MpaA晶体衍射数据的收集为后续结构解析和催化机制的阐明提供了基础.