毛细管直接PCR方法快速鉴定NDM-1阳性细菌

作     者：周小棉 刘大渔 黄华霖 Zhou Xiaomian;Liu Dayu;Huang Hualin

作者机构：广州医学院附属广州市第一人民医院检验科510180 广州医学院检验系2006级广州510182 

出 版 物：《国际检验医学杂志》 (International Journal of Laboratory Medicine)

年 卷 期：2011年第32卷第13期

页      面：1404-1406页

学科分类：100208[医学-临床检验诊断学] 1002[医学-临床医学] 10[医学] 

基　　金：国家自然基金资助项目(30870753) 科技部国际合作项目(2010DFB3380) 广东省自然基金资助项目(9151008901000190) 广东省医学科研基金资助项目(A2009518 A2010458) 广州市医药卫生科技重点项目(2009-ZDi-10 2009-ZDi-21) 广州市科信局重大科技专项资助项目(2010U1-E00681) 科技支撑计划资助项目(2010J-E241-1) 

主　　题：聚合酶链反应 基因 诊断 新德里金属酰胺酶 

摘      要：目的建立一种无需核酸提取预处理的毛细管PCR方法,用于新德里金属酰胺酶(NDM-1)阳性细菌的快速鉴定。方法考察在直接加入细菌培养液条件下,两种改良型DNA聚合酶Terra和MightyAmp DNA聚合酶对NDM-1编码基因的扩增效果。选用其中一种DNA聚合酶进行毛细管PCR,确定其对于NDM-1阳性细菌的检测限。结果当分别向25 μLPCR反应体系加入1、3、5、7μL细菌培养液条件下,两种DNA聚合酶均能有效扩增NDM-1编码基因序列,Terra DNA聚合酶效果较好。采用两步法毛细管PCR扩增NDM-1编码基因,3 μL反应体积条件下,40个循环反应在20 min内完成。结论应用改良型DNA聚合酶可以免去细菌核酸纯化步骤直接进行PCR。免核酸提取扩增结合毛细管PCR方法可以显著缩短核酸分析时间,适合于NDM-1阳性细菌的快速鉴定。