丙型肝炎病毒F蛋白克隆表达及其抗原性

作     者：高得勇 侯刚 张欣欣 金根娣 孔晓飞 张东华 龚启明 陆志檬 GAO De-yong;HOU Gang;ZHANG Xin-xin;JIN Gen-di;KONG Xiao-fei;ZHANG Dong-hua;GONG Qi-ming;LU Zhi-meng

作者机构：上海交通大学医学院附属瑞金医院感染科200025 

出 版 物：《中华传染病杂志》 (Chinese Journal of Infectious Diseases)

年 卷 期：2008年第26卷第1期

页      面：4-8页

核心收录：

学科分类：1004[医学-公共卫生与预防医学(可授医学、理学学位)] 100401[医学-流行病与卫生统计学] 10[医学] 

基　　金：国家自然科学基金资助项目(30471523) 

主　　题：肝炎病毒 病毒融合蛋白质类 克隆 分子 病毒核心蛋白质类 基因表达 

摘      要：目的在原核表达系统中诱导表达1b型HCVF蛋白及Core蛋白，建立F抗体ELISA检测方法，对F蛋白在慢性丙型肝炎患者体内的抗原性作相关研究。方法应用RT-PCR方法从HCV感染者血清中获得Core蛋白编码基因，在第42位和144位人工增加或减少1个核苷酸，使其读码框移位，利用多重PCR技术拼接获得全长F蛋白的基因序列，分别构建编码F和Core蛋白的重组质粒。将鉴定正确的重组质粒转人大肠埃希菌BL21中，加入异丙基硫代-β-D-半乳糖苷（IPTG）诱导表达HCVCore和F蛋白。应用镍离子亲和层析树脂纯化蛋白，并用Western印迹法鉴定其免疫原性。建立ELISA检测方法对121例慢性丙型肝炎患者血清中抗F蛋白抗体进行检测。结果成功构建含HCVF蛋白、Core蛋白编码基因的重组克隆，表达纯化获得的HCVF蛋白和Core蛋白，Western印迹法鉴定并确定其特异性。121例慢性丙型肝炎患者血清中抗Core和抗F抗体的阳性率分别是93％和65％，而40例HBV感染者和40例健康对照者血清反应阴性。结论F蛋白在HCV自然感染中有表达，并能产生特异的免疫反应，其生物学功能及在HCV感染过程中的作用有待进一步研究。