克隆内蒙古白绒山羊胸腺素β4基因并稳定转染胎儿成纤维细胞
Cloning of Thymosin β 4 Gene from Inner Mongolia Cashmere Goat and Its Stable Transfection into Caprine Fetal Fibroblasts Cells作者机构：内蒙古大学生命科学学院/哺乳动物生殖生物学与生物技术教育部重点实验室
出 版 物：《中国农业科学》 (Scientia Agricultura Sinica)
年 卷 期：2010年第43卷第21期
页 面：4497-4504页
核心收录：
基 金：国家自然科学基金(30860191) 国家基础科学人才培养基金(J0730648) 转基因生物新品种培育重大专项课题研究计划(2008ZX08008-002)
主 题：内蒙古白绒山羊 胸腺素β4 皮肤特异性表达载体 稳定转染
摘 要：【目的】克隆内蒙古白绒山羊胸腺素β4(thymosinbeta4,Tβ4)基因,构建皮肤特异性表达载体,转染内蒙古白绒山羊胎儿成纤维细胞,筛选出稳定表达红色荧光蛋白并可用于核移植的转基因细胞克隆。【方法】通过RT-PCR克隆Tβ4基因cDNA序列,然后与KAP6-1基因启动子片段以及红色荧光蛋白表达元件连接构成Tβ皮肤特异性表达载体pCDsRed-KT。外源表达载体以lipofectamineTM2000介导转染胎儿成纤维细胞,通过G418筛选获得稳定转染的细胞克隆。PCR鉴定外源基因在细胞基因组中的整合。【结果】克隆了内蒙古白绒山羊Tβ4基因,cDNA全长142bp,其中包含135bp的完整ORF,编码44个氨基酸残基,氨基酸序列与已报道的牛胸腺素β4(NM001002885)同源性为100%。测序显示构建的表达载体pCDsRed-KT中,Tβ4基因正确连接在皮肤特异性启动子KAP6-1下游,顺序连接CMV启动子和红色荧光蛋白基因,载体构建正确。PCR检测显示外源KAP6-1启动子和Tβ4基因整合到细胞基因组中,筛选出的转基因细胞高效表达红色荧光蛋白。【结论】克隆得到内蒙古白绒山羊Tβ4基因并构建成功其真核表达载体,可稳定转染绒山羊胎儿成纤维细胞,为下一步通过核移植方法获得转胸腺素β4基因绒山羊提供了条件。
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