基于PI3K/Akt/mTOR介导的自噬探讨毓麟护坤汤改善卵巢储备功能下降机制

作     者：王瑞霞 程欢 范亚杏 蔡庭筠 李梅芳 

作者机构：山西省中医院 山西中医药大学 

出 版 物：《中国实验方剂学杂志》 (Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae)

年 卷 期：2025年

核心收录：

学科分类：1008[医学-中药学(可授医学、理学学位)] 1006[医学-中西医结合] 100602[医学-中西医结合临床] 10[医学] 

基　　金：山西省中医药管理局科研课题(2022ZYYZ009,2022ZYYC261) 山西省中医药重点研究室项目(ZYYYJS2024002) 青年岐黄学者项目[国家中医药人教函(2022)256] 

主　　题：卵巢储备功能下降 自噬 PI3K/Akt/mTOR信号通路 毓麟护坤汤 

摘      要：目的：观察毓麟护坤汤对环磷酰胺诱导的卵巢储备功能下降模型小鼠磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）/蛋白激酶B（Akt）/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白激酶（mTOR）信号通路介导的细胞自噬的影响，探讨毓麟护坤汤改善卵泡发育的疗效机制。方法：将60只动情周期正常的雌性ICR小鼠，分为空白组10只，造模组50只，采用环磷酰胺(60 mg·kg-1)连续5 d腹腔注射造模。造模成功的小鼠随机分为模型组、雌二醇组(0.26 mg·kg-1)、毓麟护坤汤高、中、低剂量组(56.42、28.21、14.105 g·kg-1)，每组10只。空白组和模型组给予生理盐水(10 mL·kg-1)。每天干预1次，干预21 d。观察记录各组小鼠一般情况、动情周期、体质量、卵巢脏器指数；酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测血清促卵泡生成素（FSH）、黄体生成素（LH）、雌二醇(E2)、抗缪勒管激素（AMH）水平；苏木素-伊红（HE）染色观察卵巢组织病理情况；蛋白免疫印迹法（Western blot）检测小鼠卵巢PI3K、Akt、mTOR、自噬相关蛋白7（Atg7）、自噬蛋白1（Beclin1）、微血管相关蛋白1轻链3Ⅱ（LC3Ⅱ）、泛素依赖衔接蛋白（p62）、叉头框蛋白O1（FoxO1）、乙酰化-叉头框蛋白O1（Ac-FoxO1）蛋白表达；实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测小鼠卵巢组织中PI3K、Akt、mTOR、Atg7、Beclin1、LC3Ⅱ的mRNA表达情况。结果：与空白组比较，模型组小鼠动情周期紊乱，小鼠体质量下降（P0.05）；病理切片可见卵巢结构疏松、闭锁卵泡增多；血清FSH水平升高（P0.05），AMH、E2水平降低（P0.05）；治疗后，与模型组比较，各治疗组小鼠动情周期、体质量逐渐恢复正常，雌二醇组及毓麟护坤汤高、中剂量组血清FSH水平降低（P0.05），AMH水平回升（P0.05）；各治疗组小鼠卵巢组织Atg7、LC3Ⅱ、Beclinl、FoxO1、Ac-FoxO1蛋白表达明显下调（P0.01），PI3K、Akt、mTOR、p62的蛋白表达量明显上调（P0.01），病理可见治疗组卵巢结构逐渐修复，各级卵泡结构更完整且数量明显增多。结论：毓麟护坤汤可以通过激活PI3K/Akt/mTOR信号通路，抑制自噬相关蛋白及转录因子的表达，从而抑制卵巢颗粒细胞自噬，改善卵泡发育及卵巢储备功能。