多杀性巴氏杆菌OmpH蛋白间接ELISA方法的建立

作     者：王润清 孙航 阚威 李歌 李琦 侯晓林 孙雨 

作者机构：北京农学院动物医学院 中国动物疫病预防控制中心 甘肃农业大学动物医学院 青海省动物疫病预防控制中心 

出 版 物：《中国兽医科学》 (Chinese Veterinary Science)

年 卷 期：2024年

学科分类：090601[农学-基础兽医学] 09[农学] 0906[农学-兽医学] 

基　　金：国家现代农业产业技术体系建设专项(CARS39) 

主　　题：多杀性巴氏杆菌 OmpH蛋白 原核表达 蛋白纯化 ELISA 

摘      要：本试验在大肠杆菌原核表达系统中诱导出了多杀性巴氏杆菌OmpH抗原，建立了一种牛多杀性巴氏杆菌抗体ELISA检测方法。本试验分析了OmpH序列的信号肽与跨膜疏水区序列，对选择的目的基因片段进行稀有密码子优化，将化学合成后的核苷酸序列连接pET32a载体上，并构建相应的重组质粒pET32a-OmpH，将重组质粒转化进大肠杆菌BL21（DE3）感受态细胞株中，扩大培养并成功诱导表达出了纯度较高的包涵体OmpH蛋白，大小约为57 kDa，蛋白纯度约为94%，且OmpH重组蛋白与其他疫病抗体无非特异性交叉。将纯化后的pET32a-OmpH重组蛋白作为包被抗原，建立了间接ELISA检测方法，该方法特异性强，对其他牛类病原无交叉反应，且其组内与组间变异系数均低于10%，具有良好的稳定性与重复性。本研究为进一步开发成熟的多杀性巴氏杆菌抗体检测试剂盒奠定了基础。