负载人脂肪干细胞外泌体的甲基丙烯酰化明胶水凝胶对人皮肤成纤维细胞增殖和迁移的影响

作     者：刘昌玲 张金丽 张志 李孝建 汤文彬 胡逸萍 陈宾 谢晓娜 Liu Changling;Zhang Jinli;Zhang Zhi;Li Xiaojian;Tang Wenbin;Hu Yiping;Chen Bin;Xie Xiaona

作者机构：暨南大学附属广州市红十字会医院烧伤整形科510220 

出 版 物：《中华损伤与修复杂志（电子版）》 (Chinese Journal of Injury Repair and Wound Healing(Electronic Edition))

年 卷 期：2024年第19卷第6期

页      面：517-525页

学科分类：1002[医学-临床医学] 100214[医学-肿瘤学] 10[医学] 

基　　金：广州市科技局项目(2023A03J0523、2024A03J0570) 广东省基础与应用基础研究基金项目(2023A1515220237) 

主　　题：脂肪干细胞 外泌体 甲基丙烯酰化明胶 水凝胶 人皮肤成纤维细胞 

摘      要：目的研究负载人脂肪干细胞来源外泌体的甲基丙烯酰化明胶(GelMA)水凝胶对人皮肤成纤维细胞增殖和迁移的作用。方法分离和培养人脂肪干细胞,检测其表面分子标志物的表达。采用超速离心法提取人脂肪干细胞来源外泌体,应用扫描电镜、纳米流式检测技术进行鉴定。培养人皮肤成纤维细胞,采用免疫荧光检测细胞对外泌体的内化;分别加入浓度为1×10^(7)/ml、1×10^(8)/ml及1×10^(9)/ml的外泌体,检测外泌体对人皮肤成纤维细胞增殖和迁移的影响。制备浓度为5%、10%、15%的GelMA水凝胶,扫描电镜下观察GelMA水凝胶微观结构并进行孔径分析,检测水凝胶在体外的降解速度;采用ELISA法检测外泌体在水凝胶中的缓释速度,然后在水凝胶中共培养人皮肤成纤维细胞,进行活/死细胞染色,检测细胞在水凝胶中的生长及增殖情况。结果扫描电镜及纳米流式检测结果显示获取的粒子为外泌体。荧光标记的人脂肪干细胞来源外泌体能够被人皮肤成纤维细胞摄取进入细胞质及细胞核中。浓度为1×10^(7)/ml、1×10^(8)/ml、1×10^(9)/ml的外泌体均可促进人皮肤成纤维细胞的增殖和迁移(F=3.579,P=0.021);浓度为1×10^(8)/ml、1×10^(9)/ml外泌体对细胞的增殖作用较浓度为1×10^(7)/ml外泌体更强(P=0.048、P=0.005),作用24 h后浓度为1×10^(8)/ml外泌体与1×10^(9)/ml外泌体对细胞的增殖作用差异无统计学意义(P=0.091、P=0.083)。浓度为5%、10%、15%的GelMA水凝胶体外降解速度随浓度增加而减慢,浓度为5%的GelMA水凝胶能更好地缓慢持续释放外泌体,在5%的GelMA水凝胶中加入人皮肤成纤维细胞培养后,细胞在水凝胶中生长及增殖良好。结论人脂肪干细胞来源外泌体被人皮肤成纤维细胞内化后可以促进其增殖和迁移。浓度为5%负载人脂肪干细胞外泌体(1×10^(8)/ml)的GelMA水凝胶可缓慢持续释放外泌体,促进人皮肤成纤维细胞增殖,可作为外泌体的良好生物载体。