一种实用的双链RNA病毒基因组克隆方法

作     者：章松柏 吴祖建 段永平 谢联辉 林奇英 

作者机构：福建农林大学植物病毒所 福建农林大学植物病毒所 福建福州350002 

出 版 物：《长江大学学报(自科版)医学卷》 (Journal of Yangtze University(Natural Science Edition)Medicine V)

年 卷 期：2005年第2期

页      面：71-73+108页

学科分类：0710[理学-生物学] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 071007[理学-遗传学] 0901[农学-作物学] 0836[工学-生物工程] 090102[农学-作物遗传育种] 

基　　金：国家自然科学基金资助项目(39900091) 

主　　题：dsRNA病毒 基因组克隆 单引物扩增 

摘      要：以克隆水稻矮缩病毒(Ricedwarfvirus,RDV)基因组片段S11、S12为例,报道一种克隆植物dsRNA病毒基因组的方法。具体过程为:利用T4RNA连接酶将5′磷酸、3′氨基修饰的引物Primer1连接到RDV病毒基因组第11、12片段dsRNA的3′OH端,经逆转录、退火、补齐形成全长双链cDNA,使用单一的互补引物Primer2进行PCR扩增,扩增产物克隆在pMD18T载体上,对重组子进行两次限制性内切酶分析,结合序列测定分离鉴定S11、S12。结果表明,这种方法能同时克隆RDV基因片段S11、S12,是一种有效实用的dsRNA病毒基因组克隆方法。