补肾调肝中药促进细胞自噬保护关节软骨

作     者：徐兆辉 韩芳苗 张万标 陈瑞锋 范帅 谢平金 

作者机构：深圳市罗湖区中医院筋伤科 广州中医药大学第三附属医院老年骨科 

出 版 物：《现代中医药》 (Modern Chinese Medicine)

年 卷 期：2024年

学科分类：1008[医学-中药学(可授医学、理学学位)] 1006[医学-中西医结合] 100602[医学-中西医结合临床] 10[医学] 

基　　金：深圳市罗湖区软科学研究计划项目(LX20210313) 广东省中医药局科研项目(20201171) 2020年深圳市科技创新委员会基础研究面上项目(JCYJ20190812170815559) 

主　　题：自噬 关节软骨 补肾调肝中药 PRMT5 PI3K/Akt/mTOR 

摘      要：目的 观察补肾调肝中药对软骨细胞自噬水平的影响,并探讨其作用机制。方法 2021年9月—2022年2月于深圳市罗湖医疗集团精准医学研究院实验室培养软骨细胞,并按照随机数字表法随机分为4组:分别用无血清、无血清+自噬激动剂、无血清+自噬抑制剂、无血清+补肾调肝中药水提液+自噬抑制剂处理软骨细胞24 h。单丹磺酰尸胺染色法检测软骨细胞自噬小体表达;实时荧光定量PCR检测自噬相关基因ATG5、ATG7 mRNA的表达;Western blot检测LC3和磷酸化蛋白激酶(p-Akt)、磷酸化哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(p-mTOR)、磷酸化蛋白质精氨酸甲基转移酶5(p-PRMT5)、p-PI3K的蛋白表达水平。结果补肾调肝中药水提液能够提高自噬活动抑制状态下的软骨细胞的自噬水平;实时荧光定量PCR及Western blot结果显示,与无血清组比较,自噬抑制剂组中软骨细胞自噬相关基因ATG5、ATG7 mRNA和LC3-Ⅱ/Ⅰ蛋白表达水平均明显下降(P0.01),而p-Akt和p-mTOR、p-PRMT5、p-PI3K蛋白表达水平明显上升(P0.01);与之相反,自噬激动剂组的相关基因及蛋白表达水平均明显上升(P0.01),而对应抗体蛋白表达水平明显下降(P0.01);与自噬抑制剂组相比,自噬抑制剂+补肾调肝中药水提取物组中软骨细胞自噬相关基因及蛋白表达水平均明显上升(P0.01);结论 提示补肾调肝中药可能调节PRMT5调控PI3K/Akt/mTOR通路介导软骨细自噬,进而保护关节软骨,延缓关节软骨退变,起到治疗骨关节炎的作用。