基于ASS1介导的src/STAT3、MAPK/ERK级联反应探究参七虫草方对IPF模型大鼠成纤维细胞的影响

作     者：纪文雯 何程 朱恩惠 王三凤 黄丽娜 陈炜 

作者机构：安徽中医药大学第一临床医学院 安徽中医药大学第一附属医院 

出 版 物：《辽宁中医杂志》 (Liaoning Journal of Traditional Chinese Medicine)

年 卷 期：2024年

学科分类：1008[医学-中药学(可授医学、理学学位)] 1006[医学-中西医结合] 100602[医学-中西医结合临床] 10[医学] 

基　　金：国家中医药管理局青年岐黄学者人才支持项目(国中医药人教发7号文) 国家自然科学基金委员会青年基金资助项目(81704060) 安徽中医药大学临床科研项目(2021yfylc05) 安徽省临床医学研究转化专项项目(202304295107020106) 安徽省高水平传承人才支持项目(皖卫传(2023)451号) 

主　　题：特发性肺纤维化 成纤维细胞 src/STAT3 MAPK/ERK MMP-2 MMP-9 AP-1 NF-κBp65 

摘      要：目的：探究参七虫草方对博莱霉素（BLM）诱导的特发性肺纤维化（IPF）模型大鼠成纤维细胞的影响。方法：除空白组外均采用气管内滴注博来霉素的方法体外分离培养模型成纤维细胞。CCK-8法检测肺成纤维细胞增殖情况，选取最佳浓度及时间进行后续实验。。实验分为6组：空白组：正常成纤维细胞+正常含药血清（A组）、模型组：模型成纤维细胞+正常含药血清（B组）、参七虫草方最佳含药血清组（C组）、ASS1抑制剂ADI组（D组）、Src/STAT3阻断剂组（E组）、MAPK/ERK通路抑制剂组（F组）。采用CCK-8法、细胞划痕实验分别检测细胞活力和迁移速率；RT-qPCR检测精氨酸琥珀酸盐合成酶-1(ASS1)、酪氨酸激酶(src)、信号转导和转化激活因子 3(STAT3）、双特异性蛋白激酶1/2(MEK1/2)、细胞外调节蛋白激酶1/2(ERK1/2)基因表达水平；Western Blot检测各组p-ERK、激活蛋白-1（AP-1）、P-MEK、基质金属蛋白酶(MMPs)、核蛋白因子-κB p65(NF-κB p65)蛋白表达水平。结果：与A组相比，B组的细胞活力及细胞迁移速率增强和增快（P0.05）；与B组相比，其余干预组的细胞活力及细胞迁移速率减弱及降低（P0.05）。RT-qPCR检测结果：B组与A组相比，ASS1、MEK1、MEK2、ERK1、ERK2、Src、STAT3基因表达水平升高（P0.05）。与B组相比，其余干预组有关基因表达水平降低（P0.05）。WB检测结果显示：B组与A组相比，p-ERK、P-MEK、MMP-2、MMP-9、NF-κB p65、AP-1蛋白表达水平升高（P0.05）。与B组相比，其余干预组表达水平降低（P0.05）。结论：参七虫草方能够抑制ASS1介导的src/STAT3、MAPK/ERK级联反应，下调MMP-2、MMP-9、AP-1、NF-κBp65蛋白表达，改善IPF病情进展。