18O稳定同位素标记定量蛋白质组研究技术的建立与优化

作     者：钱林艺 应万涛 刘新 卢庄 蔡耘 何建勇 钱小红 Qian Lin-Yi;Ying Wan-Tao;Liu Xin;Lu Zhuang;Cai Yun;He Jian-Yong;Qian Xiao-Hong

作者机构：北京放射与辐射医学研究所  2. 沈阳药科大学 

出 版 物：《分析化学》 (Chinese Journal of Analytical Chemistry)

年 卷 期：2007年第35卷第2期

页      面：161-165页

核心收录：

学科分类：0710[理学-生物学] 071010[理学-生物化学与分子生物学] 081704[工学-应用化学] 07[理学] 08[工学] 0817[工学-化学工程与技术] 

基　　金：国家自然科学基金(No.20505019,20405017,20505018) 国家重点基础研究发展规划项目(No.2004CB518707) 北京市科技计划重大项目(No.H030230280190)资助课题 

主　　题：稳定同位素标记 18O 定量蛋白质组学 质谱 液相色谱 

摘      要：建立了18O稳定同位素标记方法,用于复杂体系蛋白质相对定量分析。对影响蛋白质标记稳定性的实验条件进行了比较和优化。结果表明,采用酶切后标记的方法,酶切肽段在胰酶催化下,在pH 5.0的K2HPO4/KH2PO4缓冲体系中,37℃18O标记反应16 h,绝大部分肽段即可达到100%的标记效率。对多个16O/18O成对肽段峰强度的动态范围及定量准确度进行了考察。结果表明,18O标记方法是一种简便、稳定、可靠的相对定量方法,10倍动态范围内,标记率相对标准偏差在18.4%以内,16O/18O峰强度呈很好的线性关系。本实验考察了标记后的肽段在不同溶液体系中的稳定性,为复杂样品的预处理和预分离的溶液条件提供了依据。