荧光染料CFSE差异浓度标记活细胞体内示踪方法

作     者：蒋泽生 高毅 

作者机构：南方医科大学附属珠江医院肝胆二科 南方医科大学再生医学研究所广东省广州市515282 

出 版 物：《中国组织工程研究与临床康复》 (Journal of Clinical Rehabilitative Tissue Engineering Research)

年 卷 期：2010年第14卷第15期

页      面：2773-2777页

学科分类：0831[工学-生物医学工程（可授工学、理学、医学学位）] 0710[理学-生物学] 0403[教育学-体育学] 1007[医学-药学(可授医学、理学学位)] 1002[医学-临床医学] 08[工学] 1010[医学-医学技术（可授医学、理学学位）] 0703[理学-化学] 0836[工学-生物工程] 

基　　金：国家自然科学基金资助项目(30972825)。课题名称:供体抗原特异性体内免疫状态体内定量检测的基础研究~~ 

主　　题：细胞示踪,体内,荧光标记,差异浓度染色 CFSE 

摘      要：背景:利用荧光染料标记活细胞体内示踪的方法较多,但是应用荧光染料浓度差异实现不同细胞体内示踪的方法目前仍不成熟。目的:观察不同浓度荧光活性染料CFSE标记的小鼠脾细胞体内示踪情况,建立稳定的单染料差异浓度标记活细胞的体内示踪方法。方法:取C57BL/6J及BALB/c小鼠脾脏制备脾细胞单细胞悬液,分别用不同浓度CFSE染色后制备1∶1混合细胞悬液;锥虫蓝染色鉴定细胞活性;将染色的混合细胞输注BALB/c小鼠后不同时间点,流式细胞仪检测小鼠外周血两种荧光细胞的比例。结果与结论:CFSE标记的小鼠脾细胞活力良好,荧光显微镜下见全部细胞标记后均发绿色荧光,形态正常,CFSE标记阳性率为95%。CFSE染色时,在浓度相差20倍时流式直方图才显示为两个完全独立的峰,即CFSE低浓度用0.3μmol/L高浓度用6μmol/L。异基因的C57BL/6J脾细胞在输注1d后就快速消失,而同基因BALB/c脾细胞能够在BALB/c小鼠外周血中长期存在,但是两种细胞荧光强度均未见降低,说明荧光染料CFSE差异浓度标记活细胞进行体内示踪是一种稳定的示踪方法。