斑点热群立克次体实时荧光定量PCR检测方法的建立及应用
Establishment and application of real-time fluorescence quantitative PCR in spotted fever group rickettsiae detection作者机构：海南省疾病预防控制中心 中国疾病预防控制中心传染病预防控制所传染病预防控制国家重点实验室
出 版 物：《现代预防医学》 (Modern Preventive Medicine)
年 卷 期：2015年第42卷第22期
页 面：4137-4139+4146页
学科分类：100208[医学-临床检验诊断学] 1002[医学-临床医学] 10[医学]
主 题：实时荧光定量PCR 外膜蛋白A基因 斑点热群立克次体
摘 要：目的探讨实时荧光定量PCR快速检测斑点热群立克次体标本的应用价值。方法根据斑点热群立克次体外膜蛋白A(Omp A)基因保守序列设计Taq Man特异性探针和引物,进行实时荧光定量PCR方法学评估,并同时运用该法和普通PCR法对对海南省2012年不明原因发热病人157份血标本进行斑点热群立克次体的检测及结果分析。结果本研究建立的定量标准曲线循环阈值(Ct值)和模板拷贝数呈良好的线性关系(R2值为0.998)。该法能检出斑点热群立克次体阳性标准品—西伯利亚立克次体(***)最小浓度为102copies/μl,灵敏度比普通PCR高100倍。用该法检测斑点热群立克次体DNA,结果为阳性,检测金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、致泻性大肠埃希菌和副溶血弧菌等其他病原细菌DNA结果均为阴性。采用实时荧光定量PCR法对实验室库存的发热病人血标本DNA进行回顾性检测,结果示阳性2例,检出率为1.2%(2/157),而普通PCR检测结果均为阴性。结论实时荧光定量PCR法具有快速、特异和灵敏的优点,在处理突发公共卫生事件中可发挥快速检测的优势,在斑点热诊断中具有重要的临床意义。
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