百日咳杆菌腺苷酸环化酶毒素基因的克隆及原核表达

作     者：石碧珠 张华捷 孟民杰 张庶民 SHI Bi-zhu△,ZHANG Hua-jie,MENG Min-jie,et al (△School of Life Science and Biopharmacy,Guangdong Pharmaceutical University,Guangzhou 510006,China)

作者机构：广东药学院生命科学与生物制药学院广州510006 中国药品生物制品检定所血清室北京100050 

出 版 物：《中国生物制品学杂志》 (Chinese Journal of Biologicals)

年 卷 期：2010年第23卷第1期

页      面：9-12页

核心收录：

学科分类：0710[理学-生物学] 0831[工学-生物医学工程（可授工学、理学、医学学位）] 1007[医学-药学(可授医学、理学学位)] 100705[医学-微生物与生化药学] 1002[医学-临床医学] 1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 100103[医学-病原生物学] 0703[理学-化学] 0836[工学-生物工程] 10[医学] 

主　　题：百日咳杆菌 腺苷酸环化酶毒素基因 克隆 表达 

摘      要：目的克隆百日咳杆菌腺苷酸环化酶毒素(CyaA,ACT)基因,表达并纯化重组CyaA蛋白。方法从百日咳杆菌CS株的基因组DNA中PCR扩增CyaA编码基因,克隆入载体pET30a,构建重组原核表达质粒pET30a/cyaA,转化感受态大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达。表达的重组蛋白经8mol/L尿素变性、透析复性、DEAE阴离子交换柱纯化后,采用Western blot法鉴定其反应原性。结果重组原核表达质粒pET30a/cyaA经PCR、双酶切及测序证明构建正确;表达的重组蛋白主要以包涵体形式存在,表达量约占菌体总蛋白的20%;纯化的重组蛋白纯度达90%左右,可与全细胞百日咳疫苗和无细胞百日咳疫苗免疫血清结合。结论已成功克隆了百日咳杆菌cyaA基因,并在大肠杆菌中表达了重组CyaA蛋白,为进一步开展CyaA的应用研究奠定了基础。