三疣梭子蟹十足目虹彩病毒1 SYBR Green I荧光定量PCR检测方法的建立及初步应用

作     者：赵丹阳 施慧 许文军 何杰 王庚申 ZHAO Dan-Yang;SHI Hui;XU Wen-Jun;HE Jie;WANG Geng-Shen

作者机构：浙江省海洋水产研究所浙江舟山316021 浙江海洋大学水产学院浙江舟山316022 

出 版 物：《海洋与湖沼》 (Oceanologia Et Limnologia Sinica)

年 卷 期：2024年第55卷第5期

页      面：1273-1281页

核心收录：

学科分类：07[理学] 0713[理学-生态学] 

基　　金：浙江省基础公益研究计划,LGN22C190005号 浙江省农业重大技术协同推广项目,2022XTTGSC04号 象山县科技计划项目,2022C1001号 

主　　题：十足目虹彩病毒1(decapod iridescent virus 1,DIV1) 荧光定量PCR SYBR GreenⅠ 检测方法 

摘      要：为建立十足目虹彩病毒1(decapod iridescent virus 1,DIV1)的SYBR GreenⅠ荧光定量PCR检测方法,根据DIV1的MCP和ATPase基因序列,设计并筛选出引物,以制备的DIV1阳性质粒标准品为模板构建标准曲线,建立DIV1的SYBR Green I qPCR方法,并对该方法进行临床初步应用。结果显示,建立的qPCR方法阈值循环数(cycle threshold value,Ct)与标准品拷贝数的对数线性关系良好,标准曲线相关系数(R^(2))为0.999;对DIV1阳性的虾蟹核酸样本能够进行特异性扩增,但对传染性脾肾坏死病毒(infectious spleen and kidney necrosis virus,ISKNV)和白斑综合征病毒(white spot syndrome virus,WSSV)阳性核酸样本均无扩增;最低检测限为9.77 copies/μL;Ct值的组内和组间变异系数均小于1%。运用该方法对70份疑似感染DIV1的虾蟹类样本进行DIV1检测,该方法阳性率为48.57%,与套式PCR检测方法的阳性率一致;利用建立的方法对DIV1阳性三疣梭子蟹的血淋巴、肝胰腺及心脏等组织进行定量检测分析,结果显示各组织中均存在DIV1,其中血淋巴中DIV1平均拷贝数最高。研究表明,建立的SYBR GreenⅠ荧光定量PCR方法特异性强、灵敏度高、重复性好,可用于对DIV1的快速、定量检测,对十足目虹彩病毒病的诊断和防控具有重要意义。