非洲猪瘟病毒分子信标荧光定量PCR检测方法的建立

作     者：钟健豪 高寒 杨吉飞 邝麒元 高校鹏 李跃 牛庆丽 关贵全 殷宏 张桂红 卢刚 孙彦阔 

作者机构：华南农业大学兽医学院广东省动物源性人兽共兽病预防与控制重点实验室 中国农业科学院兰州兽医研究所动物疫病防控全国重点实验室 华南农业大学非洲猪瘟防控技术研究中心国家非洲猪瘟区域实验室(广州) 甘肃省病原生物学基础学科研究中心国家非洲猪瘟区域实验室(兰州) 扬州大学江苏高校动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心 

出 版 物：《中国兽医科学》 (Chinese Veterinary Science)

年 卷 期：2024年

学科分类：090601[农学-基础兽医学] 09[农学] 0906[农学-兽医学] 

基　　金：国家重点研发计划项目(2021YFD1800100) 农业科技创新工程项目(CAAS-ASTIP-2021-LVRI) 甘肃省科技重大专项(22ZD6NA001) 甘肃省基础研究创新群体项目(22JR5RA024) 

主　　题：非洲猪瘟病毒 分子信标 实时荧光定量 检测方法 

摘      要：本试验旨在利用新型荧光探针-分子信标建立一种检测非洲猪瘟病毒（ASFV）的分子信标实时荧光定量PCR（qPCR）检测方法。根据ASFVB646L基因序列的保守区域设计特异性引物和分子信标探针，通过反应体系和反应条件的优化，建立标准曲线，测定本方法的敏感性、特异性和重复性；并通过检测207份临床样本，比较本方法与国家标准qPCR方法和商品化ASF检测试剂盒之间的符合率以及得出 kappa系数。结果显示，该方法标准曲线的线性关系良好，相关系数为 0.997 4，最低检出浓度为1copies/μL，且与5种常见猪源病原体之间无交叉反应，组内与组间的变异系数均小于1.81%；临床样品检测结果显示，本方法与国家标准 qPCR方法和商品化ASF检测试剂盒的总体符合率分别为 97.10%和 98.55%，kappa系数分别为 0.910 4和 0.955 6。结果表明，本试验建立的ASFV检测方法特异性强、灵敏度高、重复性好、检测结果可靠，为 ASF的检测和该病的防控提供了技术支持。