预扩增qPCR技术检测少量猪早期胚胎细胞基因表达的研究

作     者：晏超 刘永刚 谢浩 彭翠婷 张才用 赵玉兰 齐霖 陈指龙 唐中林 

作者机构：中国农业科学院(深圳)农业基因组研究所 云南农业大学动物科学技术学院 佛山鲲鹏现代农业研究院 岭南现代农业科学与技术广东省实验室深圳分中心 农业农村部畜禽生物组学重点实验室 

出 版 物：《畜牧兽医学报》 (Acta Veterinaria et Zootechnica Sinica)

年 卷 期：2024年

核心收录：

学科分类：0905[农学-畜牧学] 09[农学] 090501[农学-动物遗传育种与繁殖] 

基　　金：广东省基础与应用基础研究基金委员会区域联合基金—青年基金项目(2021A1515110046) 深圳市可持续发展科技专项项目(KCXFZ20201221173213037) 国家自然科学基金青年项目(32302747) 

主　　题：预扩增 qPCR 猪早期胚胎 微量细胞 基因表达 

摘      要：旨在比较3种qPCR方法检测少量猪早期胚胎细胞多能性和组蛋白乙酰化修饰相关基因的动态表达情况。本研究收集不同时期（1-细胞、2-细胞、4-细胞、8-细胞、桑葚胚和囊胚）猪孤雌激活胚胎，利用常规RT-qPCR、cDNA预扩增qPCR和样本直接预扩增qPCR检测微量胚胎细胞多能性和组蛋白乙酰化修饰相关基因的表达情况。结果显示，预扩增qPCR具有稳定的扩增曲线，熔解曲线呈现稳定单峰，而常规RT-qPCR检测的扩增曲线循环阈值在35以上，熔解曲线呈现多峰；胚胎细胞直接预扩增后的样品稀释20 000倍仍能检测目的基因的表达，且能稳定检测单个胚胎细胞的基因表达情况；多能性和组蛋白乙酰化修饰相关基因在猪孤雌激活早期胚胎发育过程中呈现先升高后降低的表达趋势，在基因组激活阶段的表达水平最高。综上表明，样本直接预扩增qPCR的检测灵敏性和准确性更高，且操作相对简单、成本较低，适用于微量胚胎细胞的基因表达检测，可为研究早期胚胎发育机制提供方法参考。