六味地黄二至丸合剂影响髓源性抑制细胞与乳腺癌肺转移的相关性

作     者：郑里翔 郭子锋 郭慧文 王晓敏 许传铭 胡玉亮 ZHENG Lixiang;GUO Zifeng;GUO Huiwen;WANG Xiaomin;XU Chuanming;HU Yuliang

作者机构：江西中医药大学南昌330004 江西省南昌市新建区人民医院南昌330100 

出 版 物：《中国实验方剂学杂志》 (Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae)

年 卷 期：2024年第30卷第20期

页      面：37-45页

核心收录：

学科分类：100504[医学-方剂学] 1005[医学-中医学] 1002[医学-临床医学] 1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 100214[医学-肿瘤学] 100501[医学-中医基础理论] 10[医学] 

基　　金：国家自然科学基金项目(81160531) 江西省自然科学基金重点项目(20232ACB206053) 江西省科技厅重点研发计划项目(20203BBGL73205) 

主　　题：六味地黄二至丸合剂 乳腺癌 肺转移 髓源性抑制细胞(MDSCs) 上皮间充质转化(EMT)相关蛋白表达 CC基序趋化因子9(CCL9)/CC基序趋化因子受体1(CCR1)蛋白表达 

摘      要：目的:探讨六味地黄二至丸合剂(合剂)通过调节髓源性抑制细胞(MDSCs)募集抑制自发乳腺癌小鼠肺转移进程的机制。方法:SPF级10月龄的昆明种小鼠雌种鼠380只,每3 d触诊乳腺部位1次。饲养6个月后仍未触摸到肿块的小鼠作为空白组,发瘤后的小鼠随机分为模型组、紫杉醇组(0.01 g·kg^(-1),腹腔注射,隔日1次,22 d)、六味地黄丸组(0.65 g·kg^(-1)·d^(-1),灌胃)、二至丸组(5.41 g·kg^(-1)·d^(-1),灌胃)及六味地黄丸二至丸合剂组(6.05 g·kg^(-1)·d^(-1),灌胃),小鼠肿块直径达到15 mm左右时,进行安乐死,剥离肿瘤和肺组织。记录发瘤小鼠生存期、瘤组织质量及肺转移率。苏木素-伊红(HE)染色观察小鼠肿瘤与肺组织病理形态变化,免疫荧光(IF)检测淋巴细胞抗原6复合物位点G6D(Ly6G)、CD11抗原样家族成员B(CD11b)双染MDSCs细胞检测各组小鼠MDSCs在组织中的分布。蛋白免疫印迹法(Western blot)检测小鼠肿瘤组织中基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、转化生长因子-β(TGF-β)、锌指转录因子1(Snail1)、E-钙黏蛋白(E-cadherin)与小鼠肺组织中CC基序趋化因子9(CCL9)、CC基序趋化因子受体1(CCR1)的蛋白表达。结果:造模期间,与模型组比较,紫杉醇组与中药给药组小鼠存活中位天数增多,瘤重、肺转移率和肺部结节评分均明显减低(P0.05,P0.01),HE染色可见紫杉醇组和合剂组肿瘤细胞坏死增多。在原位肿瘤组织中,与模型组比较,紫杉醇组与中药给药组MDSCs荧光强度均明显下降(P0.05,P0.01)。在转移肺组织中,与空白组比较,模型组MDSCs荧光强度显著增加(P0.01);与模型组比较,紫杉醇组与中药给药组MDSCs荧光强度均显著下降(P0.01)。在原位肿瘤组织中,与空白组比较,模型组MMP-9、TGF-β、Snail1蛋白表达量均显著增多(P0.01),E-cadherin表达量显著较少(P0.01);与模型组比较,紫杉醇组与中药给药组MMP-9、TGF-β、Snail1蛋白表达量均明显减低(P0.05,P0.01),E-cadherin蛋白表达显著升高(P0.01);且合剂组中TGF-β、Snail1蛋白表达均明显低于六味地黄丸组、二至丸组(P0.05)。在转移肺组织中,与空白组比较,模型组CCL9与CCR1表达量均显著增加(P0.01);与模型组比较,紫杉醇组与中药给药组各给药组CCL9与CCR1表达量均明显降低(P0.05,P0.01)。结论:六味地黄二至丸合剂抑制自发性乳腺癌小鼠肿瘤生长,延长其生存时间,减少肺转移的发生,其机制可能是通过减少MDSCs在原位肿瘤及肺组织内的募集,调节EMT相关分子的表型及CCL9/CCR1表达,从而抑制乳腺癌的肺转移。