鹅PIT-1基因启动子区转录调控的研究

作     者：赵荣雪 赵文明 徐琪 段修军 董飚 孙国波 毕瑜林 李秀 张扬 黄正洋 陈国宏 ZHAO Rong-xue;ZHAO Wen-ming;XU Qi;DUAN Xiu-jun;DONG Biao;SUN Guo-bo;BI Yu-lin;LI Xiu;ZHANG Yang;HUANG Zheng-yang;CHEN Guo-hong

作者机构：扬州大学动物科学与技术学院扬州225009 国家级水禽基因库泰州225300 

出 版 物：《畜牧兽医学报》 (ACTA VETERINARIA ET ZOOTECHNICA SINICA)

年 卷 期：2012年第43卷第2期

页      面：220-225页

核心收录：

学科分类：0905[农学-畜牧学] 09[农学] 090501[农学-动物遗传育种与繁殖] 

基　　金：现代农业产业技术体系建设专项资金(nycytx-45-04) 优质高产水禽新品种选育国家科技部支撑计划重大专项资金(2006BDA01A09) 国家科技支撑计划重点项目(2006BDA14B06) 江苏省属高校自然科学基础研究面上项目(07KJB230138) 

主　　题：鹅 PIT-1基因 启动子 荧光素酶基因表达载体 转录调控 

摘      要：为研究垂体特异性转录因子(Pituitary transcription factor 1,PIT-1)启动子的转录调控机制,寻找该基因转录调控的顺式作用元件、反式作用因子和基本转录单位。利用前期染色体步移技术扩增得到鹅PIT-1基因的启动子区序列,经PCR扩增,定向亚克隆至荧光素酶表达载体pGL3-Basic中,把目的片段连接到荧光素酶报告基因载体(pGL-Basic),制备了一系列启动子缺失体(-1 485/-1bp、-1 293/-1bp、-1 014/-1bp、-775/-1bp、-561/-1bp、-353/-1bp和-206/-1bp),并通过限性内切酶酶切、PCR及测序进行鉴定,构建了含有正确目的基因的报告基因重组体,然后瞬时转染GH3细胞,利用荧光素酶报告基因检测试剂盒检测。本试验所克隆的PIT-1基因启动子区具有明显的启动子活性,其中-561/-1bp的启动活性最强,该区域存在有PIT-1、POU3F2、myogenin和GR等多个转录因子结合位点。利用系列缺失法成功构建了荧光素酶报告基因真核表达载体,并且验证了克隆的启动子具有启动活性,找到了正负调控区域及核心启动子区,为进一步研究其转录调控机制奠定了基础。