纤维蛋白原过表达冠心病血瘀证大鼠的血小板代谢组学分析

作     者：周曼丽 祝家乐 王丽萍 简维雄 

作者机构：湖南中医药高等专科学校 湖南中医药大学 湖南医药学院 

出 版 物：《中国实验方剂学杂志》 (Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae)

年 卷 期：2024年

核心收录：

学科分类：100506[医学-中医内科学] 1006[医学-中西医结合] 1005[医学-中医学] 10[医学] 100602[医学-中西医结合临床] 

基　　金：湖南省自然科学基金项目(2022JJ30433) 湖南省研究生科研创新项目(CX20220781) 

主　　题：纤维蛋白原过表达 冠心病血瘀证 血小板 代谢组学 生物标志物 自噬 

摘      要：目的：通过分析纤维蛋白原（FIB）过表达冠心病（CHD）血瘀证（BSS）大鼠血小板的代谢组学特征，挖掘潜在生物标志物，探讨FIB过表达对CHD-BSS的影响机制。方法：将20只雄性SD大鼠随机分为BSS组和BSS+FIB过表达组（BSS+FIB组）各10只。BSS+FIB组与BSS组均在高脂饮食喂养的基础上结合维生素D3灌胃及异丙肾上腺素皮下注射，BSS+FIB组大鼠在造模初期利用腺相关病毒（AAV）转染以过表达FIB。分别采用酶联免疫吸附测定法（ELISA）和实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测大鼠肝脏和血浆样本中FIB的过表达水平；利用超高效液相-四极杆-静电场轨道阱高分辨质谱法（UPLC-Q-Exactive Orbitrap-MS）研究大鼠血小板样本的代谢物特征，结合主成分分析（PCA）和正交偏最小二乘法-判别分析（OPLS-DA）筛选组间差异代谢物并进行通路富集分析，利用受试者工作特征曲线（ROC）对潜在生物标志物用于CHD-BSS诊断的准确性进行评价；蛋白免疫印迹法（Western blot）检测血小板磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶（p-AMPK）/腺苷酸活化蛋白激酶（AMPK）、磷酸化哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（p-mTOR）/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）、微管相关蛋白1轻链3（LC3）Ⅱ/Ⅰ和p62蛋白的水平。结果：ELISA结果显示，与BSS组比较，BSS+FIB组肝脏和血浆样品中FIB的表达水平均明显升高（P0.05，P0.01）；Real-time PCR结果也显示，与BSS组比较，BSS+FIB组肝脏FIB mRNA的表达水平显著升高（P0.01）。血小板代谢组学结果显示，BSS+FIB组与BSS组的代谢轮廓存在差异，共筛选出25条显著富集的代谢通路，在通路富集的8个代谢物中，尿酸、鸟苷、核糖1-磷酸水平上调，二磷酸腺苷（ADP）、一磷酸腺苷（AMP）、二磷酸鸟苷（GDP）、腺苷酸琥珀酸、去甲肾上腺素水平下调；Western blot结果显示，与BSS组比较，BSS+FIB组大鼠血小板p-AMPK/AMPK、LC3Ⅱ/Ⅰ蛋白表达升高，但差异均无统计学意义，而p-mTOR/mTOR和p62蛋白的表达水平显著降低（P0.01）。结论：FIB过表达可改变CHD-BSS大鼠模型的代谢特征，涉及血管内皮损伤、血小板活化及心肌功能受损多个方面。其中，FIB的过表达可能会强化血小板自噬的发生，进而诱导血小板活化，促使血栓形成。