基于CRISPR/Cas9技术的哺乳动物细胞基因敲入的策略优化与效率提升

作     者：邹爽 孟德豪 李贺年 张艳芬 马宁 ZOU Shuang;MENG Dehao;LI Henian;ZHANG Yanfen;MA Ning

作者机构：哈尔滨医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室哈尔滨150081 哈尔滨医科大学附属第二医院检验科哈尔滨150000 黑龙江省遗传改变模式动物重点实验室哈尔滨150081 

出 版 物：《生命的化学》 (Chemistry of Life)

年 卷 期：2024年第44卷第8期

页      面：1433-1441页

学科分类：0710[理学-生物学] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 071007[理学-遗传学] 0901[农学-作物学] 0836[工学-生物工程] 090102[农学-作物遗传育种] 

基　　金：黑龙江省省级领军人才梯队后备带头人项目(2018) 哈尔滨医科大学少帅揭榜项目(HMUMIF-21025) 黑龙江省教育厅教改课题重点委托项目(SJGZ20200109) 哈尔滨医科大学附属第二医院中青年创新科学研究基金项目(2020) 

主　　题：CRISPR/Cas9 基因敲入 同源重组修复 非同源末端连接 

摘      要：CRISPR基因编辑系统自问世以来,极大推动了疾病治疗、药物研发、疾病模型构建等领域的研究进展。基于该系统的基因敲入(knock-in,KI)策略已成为基因工程生物制备与基因治疗等应用的常用策略。但外源DNA的敲入,尤其是较大DNA片段的敲入效率一直是该策略有待优化的问题。研究者已从基因(组)编辑系统、DNA损伤修复、细胞周期调节等方面进行了提升KI效率的探索。本文主要针对以上方面进行综述,阐述影响KI效率的关键因素与提升KI效率的优化策略。