利用单B细胞分选技术制备猪瘟E2蛋白单克隆抗体及其在ELISA中的应用

作     者：马中元 郑君佐 梁志博 潘丽 曾巧英 

作者机构：甘肃农业大学动物医学院 中国农业科学院兰州兽医研究所 

出 版 物：《畜牧兽医学报》 (Acta Veterinaria et Zootechnica Sinica)

年 卷 期：2024年

核心收录：

学科分类：090602[农学-预防兽医学] 09[农学] 0906[农学-兽医学] 

基　　金：国家生猪技术创新中心战略重点研究项目(NCTIP-XD/C03) 

主　　题：猪瘟 E2 单B细胞 表位 ELISA 

摘      要：本研究旨在建立一种猪瘟病毒E2单抗竞争ELISA检测方法，用于评价猪瘟C株弱毒苗和E2亚单位疫苗的免疫效果。首先，构建猪瘟E2杆状病毒表达载体pFastBAC，通过悬浮培养SF9细胞高效表达E2蛋白；其次，用纯化的E2蛋白免疫BABL/c小鼠，通过流式分选IgM-PE-/E2-APC+型单个B细胞。然后，半巢式PCR分别扩增E2特异性IgG抗体的重链和轻链，测序后将抗体重链及轻链构建到pCDNA3.1载体，再将构建好的质粒共转染至HEK-293细胞，制备猪瘟E2单克隆抗体。结果表明，本研究通过单B细胞分选技术获得的两株单克隆抗体，即mAb3A9（IgG1，kappa）和mAb4F7（IgG2a，lambda），分别识别猪瘟E2蛋白B细胞线性表位25GLTTTWKEYSHDLQL39和259GNTTVKVHASDERGP273。此外，用上述两株单克隆抗体及E2蛋白建立的单抗竞争ELISA检测方法，在血清样本检测过程中，均展现出优异的诊断敏感性（97.49%，95.97%）及特异性（96.08%，94.38%），该研究为我国猪瘟的逐步净化提供了有利的技术支撑。