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一株羊肠道病毒的分离鉴定及其基因组特征分析

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中国兽医科学 2024年第4期54卷 511-518页

作者：张雨星马雪青李平花魏达礼李冬张婧王卉袁红王萌白兴文刘在新卢曾军曾巧英王桂荣孙普甘肃农业大学动物医学院甘肃兰州1730070 中国农业科学院兰州兽医研究所兰州大学动物医学与生物安全学院动物疫病防控全国重点实验室甘肃兰州730046 甘肃省病原生物学基础学科研究中心甘肃兰州730046

本研究利用宏基因组测序技术,从死亡湖羊淋巴组织中检测出小反刍兽疫病毒与羊肠道病毒混合感染,为了分离羊肠道病毒,采取病毒总RNA转染BHK21细胞方法,连续传代后,通过致细胞病变、测序、TCID_(50)测定和病毒一步生长曲线、电镜观察等鉴... 详细信息

本研究利用宏基因组测序技术,从死亡湖羊淋巴组织中检测出小反刍兽疫病毒与羊肠道病毒混合感染,为了分离羊肠道病毒,采取病毒总RNA转染BHK21细胞方法,连续传代后,通过致细胞病变、测序、TCID_(50)测定和病毒一步生长曲线、电镜观察等鉴定分离出病毒,并与参考毒株比对分析分离病毒的基因特征。结果显示,转染病毒总RNA的BHK21细胞传至第2代就出现了明显的致细胞病变效应,测序证明培养物中仅含羊肠道病毒,其基因组全长为7446 nt,其中5′UTR长821 nt,3′UTR长109 nt,ORF长6516 nt,与参考毒株比较可划分为G种肠道病毒,病毒粒子大小为20~30 nm,第6代细胞毒感染8 h时TCID_(50)值最高,为10^(-4.2)/0.1 mL,命名为JSNT/1/2022株。本研究首次利用组织病料RNA转染细胞的方法成功分离出1株羊肠道病毒,说明羊肠道病毒核酸具有感染性,为羊肠道病毒的分离鉴定探索了一种更为可靠的方法,也为羊肠道病毒相关基础与应用研究奠定了病原学基础。

关键词：羊肠道病毒分离鉴定 RNA感染性基因组

经鼻高流量氧疗与无创正压通气对AECOPD伴Ⅱ型呼吸衰竭痰液粘稠患者的临床疗效对比研究

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经鼻高流量氧疗与无创正压通气对AECOPD伴Ⅱ型呼吸衰竭痰液粘稠患...

作者：曾巧英山西医科大学

学位级别：硕士

目的:探讨经鼻高流量氧疗(HFNC)与无创正压通气(NPPV)治疗慢性阻塞性肺疾病(AECOPD)伴II型呼吸衰竭(7.35>PH>7.25、80mm Hg>Pa CO>50mm Hg)痰液粘稠患者的临床疗效比较。方法:选取2020年11月到2022年2月份山西省汾阳医院呼吸与危重症医... 详细信息

目的:探讨经鼻高流量氧疗(HFNC)与无创正压通气(NPPV)治疗慢性阻塞性肺疾病(AECOPD)伴II型呼吸衰竭(7.35>PH>7.25、80mm Hg>Pa CO>50mm Hg)痰液粘稠患者的临床疗效比较。方法:选取2020年11月到2022年2月份山西省汾阳医院呼吸与危重症医学科收治入院的AECOPD伴II型呼吸衰竭痰液粘稠度为III度的患者70例,随机分为经鼻高流量氧疗35例,无创正压通气35例,比较两组患者治疗前后痰液粘稠度、咳痰难易度、咳嗽症状积分、Borg呼吸困难评分、PH、Pa CO、Pa O及两组的住院时间、插管率差异。结果:入院治疗48小时后,两组痰液粘稠度、咳痰难易度、咳嗽症状积分、Brog呼吸困难评分均较治疗前明显降低(P0.05)。在转归方面,经鼻高流量氧疗组较无创正压通气组住院时间短(P0.05)。结论:在AECOPD伴II型呼吸衰竭(7.35>PH>7.25、80mm Hg>Pa CO>50mm Hg)痰液粘稠患者中,经鼻高流量氧疗治疗较无创正压通气治疗可以减少患者咳嗽、咳痰、呼吸困难的症状,并且减少住院时间;在改善患者呼吸衰竭、减少插管率方面与无创正压通气大致相同;因此,经鼻高流量氧疗在AECOPD伴II型呼吸衰竭(7.35>PH>7.25、80mm Hg>Pa CO>50mm Hg)痰液粘稠患者中可作为首选推荐。

关键词：经鼻高流量氧疗无创正压通气慢性阻塞性肺病疾病急性加重期 Ⅱ型呼吸衰竭

内肽酶O对马链球菌兽疫亚种突破血脑屏障的影响

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中国兽医学报 2022年第10期42卷 2022-2030页

作者：尚天甜彭婕鲁强生刘旭明曾巧英甘肃农业大学动物医学学院甘肃兰州730070

运用同源重组法构建马链球菌兽疫亚种(SEZ) ATCC35246株(SEZ WT)pepO基因缺失株(SEZ△pepO)及互补株(SEZ C△pepO),比较分析pepO基因对SEZ形态特征、生长性能、感染小鼠的能力、小鼠全血存活率及小鼠脑组织定殖能力的影响;观察感染后小... 详细信息

运用同源重组法构建马链球菌兽疫亚种(SEZ) ATCC35246株(SEZ WT)pepO基因缺失株(SEZ△pepO)及互补株(SEZ C△pepO),比较分析pepO基因对SEZ形态特征、生长性能、感染小鼠的能力、小鼠全血存活率及小鼠脑组织定殖能力的影响;观察感染后小鼠脑组织的病理变化;选取人脑微血管内皮细胞(hBMEC)为体外血脑屏障模型细胞,测定pepO基因对hBMEC细胞的黏附侵袭能力以及对体外血脑屏障模型的穿透能力的影响。结果显示,pepO基因缺失后不影响SEZ在培养基中的生长速率,也不影响SEZ在小鼠全血中的存活率,但缺失株感染小鼠的能力显著降低(P<0.05),在小鼠脑组织细菌载量显著降低(P<0.05);SEZ WT株和SEZ C△pepO株感染组小鼠脑组织出现明显充血、出血、水肿的脑膜炎症状,组织切片可见大量出血及炎性细胞浸润,SEZ△pepO株感染组小鼠脑组织未见明显病变;SEZ△pepO对hBMEC细胞的黏附侵袭率以及对体外血脑屏障模型的穿透率较SEZ WT和SEZ C△pepO均显著降低(P<0.001)。本研究初步证明内肽酶O与SEZ毒力密切相关,并可促进SEZ穿透血脑屏障,有助于进一步阐明SEZ致脑膜炎的机制。

关键词：马链球菌兽疫亚种内肽酶O 毒力血脑屏障

无创呼吸支持期间自戕式肺损伤的发生机制及防治进展

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现代医学 2022年第7期50卷 919-923页

作者：曾巧英贾俊青山西医科大学山西太原030000 山西省汾阳医院山西汾阳032200

无创呼吸支持(无创通气、经鼻高流量氧疗)在急性呼吸窘迫综合征患者中的作用还存在争议。研究发现,虽然无创呼吸支持可以避免气管插管,但当无创呼吸支持治疗失败时反而会导致死亡率升高,而自戕式肺损伤可能是导致此结果的机制,如何防止... 详细信息

无创呼吸支持(无创通气、经鼻高流量氧疗)在急性呼吸窘迫综合征患者中的作用还存在争议。研究发现,虽然无创呼吸支持可以避免气管插管,但当无创呼吸支持治疗失败时反而会导致死亡率升高,而自戕式肺损伤可能是导致此结果的机制,如何防止无创呼吸支持期间自戕式肺损伤成为研究热点。本文作者主要对自戕式肺损伤的生理机制、如何防止自戕式肺损伤优化无创呼吸支持的研究进展作一综述。

关键词：无创呼吸支持自戕式肺损伤急性呼吸窘迫综合征综述

绵羊痘病毒A11R基因的优化表达及抗体间接ELISA方法的建立

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中国兽医科学 2022年第8期52卷 978-984页

作者：朱学亮赵志荀蒙学莲曾巧英甘肃农业大学动物医学院甘肃兰州730070 中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室甘肃兰州730046

本研究旨在对免疫原性目的蛋白基因A11R优化表达的基础上建立羊痘血清学检测方法,为羊痘防控提供技术支撑。绵羊痘病毒A11R基因经密码子优化后合成目的基因,连入pET-28a(+)载体,并转化至BL21(DE3)大肠杆菌,pET28a-A11R经鉴定后进行诱导... 详细信息

本研究旨在对免疫原性目的蛋白基因A11R优化表达的基础上建立羊痘血清学检测方法,为羊痘防控提供技术支撑。绵羊痘病毒A11R基因经密码子优化后合成目的基因,连入pET-28a(+)载体,并转化至BL21(DE3)大肠杆菌,pET28a-A11R经鉴定后进行诱导表达。结果显示,经密码子优化后的A11R蛋白的表达量显著增加,更易从转化的大肠杆菌裂解上清液和经过复性的包涵体中大量纯化获得。将该蛋白作为包被抗原,通过优化反应条件,建立检测羊痘抗体的间接ELISA方法,并进行特异性和敏感性试验,用该方法与商业化试剂盒对临床样品进行检测。结果显示,A11R蛋白的最佳包被剂量为0.5μg/孔,待检血清最适稀释度为1∶100,家兔抗羊Ig G最适稀释度为1∶20 000。用建立的间接ELISA方法检测小反刍兽疫、羊口疮、口蹄疫的阳性血清,结果均为阴性,无交叉反应,具有良好的特异性。当羊痘阳性血清稀释到1∶1 600时抗体检测仍为阳性,具有较高的敏感性。用该ELISA方法与商业化试剂盒检测临床样品,符合率为98.71%,具有良好的一致性。上述结果表明,本研究建立了基于A11R蛋白的羊痘血清学免疫诊断方法,同时表明了密码子偏好性的优化可显著提高蛋白表达量。

关键词：绵羊痘病毒 A11R基因密码子优化诱导表达 ELISA方法

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肉毒神经毒素:一个老毒素的新密码

甘肃农业大学学报 2018年第6期53卷 1-9页

作者：曾巧英甘肃农业大学动物医学院甘肃兰州730070

肉毒梭菌长期进化形成了独特的旱地(草地)和湿地两套自然循环机制,厌氧和产芽胞是成就其自然循环最合理的进化选择.肉毒梭菌本身无侵袭力,致病性全取决于毒素,即肉毒神经毒素(肉毒素)(botulinum neurotoxins,BoNTs,botulin),致野生及家... 详细信息

肉毒梭菌长期进化形成了独特的旱地(草地)和湿地两套自然循环机制,厌氧和产芽胞是成就其自然循环最合理的进化选择.肉毒梭菌本身无侵袭力,致病性全取决于毒素,即肉毒神经毒素(肉毒素)(botulinum neurotoxins,BoNTs,botulin),致野生及家养脊椎动物肉毒中毒(botulism).据肉毒素抗原性将其分为不同的血清型(毒素型),目前已鉴定的毒素血清型已超过40个,产生肉毒素的细菌按遗传关系可分为7个种.毒素抗原性虽不同,但空间结构均相似,均含3个功能域:HC受体结合域、HN穿膜域和LC活性域.BoNTs-LC具Zn^(2+)依赖蛋白酶活性,降解外周运动神经元的突触融合复合体蛋白,从而阻断神经递质释放,致肌肉麻痹.

关键词：肉毒神经毒素肉毒梭菌血清型致病机理

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甘蔗与斑茅杂交后代的SSR标记鉴定方法

分子植物育种 2023年第21期21卷 7085-7096页

作者：黄郑晖林焕章曾巧英崔方庆齐永文仲恺农业工程学院农业与生物学院广州510225 广东省科学院南繁种业研究所广州510316 广西壮族自治区农业科学院甘蔗研究所广西甘蔗遗传改良重点实验室南宁530007

为简化甘蔗与斑茅杂交后代鉴定程序、缩短鉴定时间,提高检测准确性,本研究在前期简化基因组调研测序开发的SSR引物基础上,选取部分引物对其在甘蔗DNA混液、斑茅DNA混液、主要栽培种及甘蔗与斑茅杂交后代DNA的扩增情况进行分析。结果表明... 详细信息

为简化甘蔗与斑茅杂交后代鉴定程序、缩短鉴定时间,提高检测准确性,本研究在前期简化基因组调研测序开发的SSR引物基础上,选取部分引物对其在甘蔗DNA混液、斑茅DNA混液、主要栽培种及甘蔗与斑茅杂交后代DNA的扩增情况进行分析。结果表明,选取的381对引物在斑茅DNA混液和10个甘蔗栽培种DNA混液中有363对引物在斑茅混液中检测到扩增产物,其中86对只在斑茅混液检测到扩增产物。将上述86对引物在192个甘蔗栽培种中进行扩增分析,筛选得到4对仅在斑茅及甘蔗与斑茅的后代有特异扩增条带的特异性引物。本研究可实现简单、快速、准确鉴定甘蔗和斑茅杂交后代的斑茅血缘,有利于高效地获得真实的杂种后代,加快甘蔗和斑茅杂交后代育种进程。

关键词：甘蔗(Saccharum) 斑茅(Erianthus arundinaceus) SSR标记鉴定

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HoCP系列美国甘蔗种质资源育种价值评价

热带作物学报 2023年第2期44卷 273-281页

作者：吴嘉云曾巧英陈勇生刘睿黄咏虹高小宁广东省甘蔗遗传改良工程技术研究中心/广东省科学院南繁种业研究所广东广州510316

为了解美国引进的HoCP系列甘蔗种质资源的育种价值,本研究以HoCP00-1142、HoCP01-517、HoCP01-564、HoCP02-610、HoCP02-623、HoCP03-704、HoCP03-708、HoCP03-716、HoCP05-902、HoCP07-613、HoCP07-617和HoCP92-648等12个HoCP品系为核心亲本配置了73个杂交组合,采用家系评价方法,对12个HoCP系列亲本及其73个组合F1群体的株高、茎径、有效茎数、蔗糖分和蔗茎产量等5个主要性状的配合力效应值、经济育种值等参数进行估算。结果表明,5个性状中除了株高在母本间无差异,其他性状在母本、父本及组合间均存在显著差异。作为母本,11个亲本当中HoCP03-704的株高,HoCP02-623的茎径,HoCP02-610的有效茎数,HoCP07-617的蔗糖分及HoCP92-648的蔗茎产量一般配合力最高;而作为父本HoCP03-704的株高,HoCP02-623的茎径,HoCP07-617的有效茎数,HoCP03-708的蔗糖分及HoCP02-623的蔗茎产量的一般配合力最高。从经济育种值来看,HoCP02-623、HoCP03-708和HoCP92-648作为母本经济育种值较高,同时蔗糖分和蔗茎产量的一般配合力效应值也较高,适宜作高产高糖的母本。HoCP01-517和HoCP07-617作为父本的经济育种值较高,同时在蔗糖分和蔗茎产量的一般配合力效应值较高,适宜作高产高糖的父本。73个组合中,以HoCP03-704×‘内江03-218’的株高,‘粤糖00-236’×HoCP00-1142的茎径,‘崖城07-71’×HoCP05-902的有效茎数,‘粤糖00-236’×HoCP03-708的蔗糖分,HoCP01-564×‘桂糖92-66’的蔗茎产量的特殊配合力最高。38个组合的经济育种值为正值,其中‘粤糖94-128’×HoCP01-517,HoCP01-564×‘桂糖92-66’、‘桂糖02-467’×HoCP01-564等组合蔗茎产量和蔗糖分特殊配合力和组合经济育种值均较优,可作为今后重点的生产性家系,而HoCP03-716×‘福农02-6404’,‘粤糖99-66’×HoCP01-564和‘粤农73-204’×HoCP01-564等组合的各性状的特殊配合力较低,同时经济育种值也低,不适宜作为生产性家系应用。以上结果为利用美国HoCP系列甘蔗种质资源进行杂交组合选配提供了参考。

关键词：甘蔗美国种质资源一般配合力特殊配合力经济育种值育种

两株不同血清型禽源多杀性巴氏杆菌的理化特性研究

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中国兽医科技 1999年第11期29卷 31-33页

作者：曾巧英甘肃农业大学动物医学系甘肃兰州730070

禽源多杀性巴氏杆菌Ｐ１０５９（８∶Ａ型）和Ｃ４８１（５∶Ａ型）对营养的需要较高，在一般培养基上生长不良，相比之下，Ｃ４８１比Ｐ１０５９生长更差，但在胰蛋白胨肉汤和加５ｍＬ／Ｌ血清的普通培养基中两株菌均生长... 详细信息

禽源多杀性巴氏杆菌Ｐ１０５９（８∶Ａ型）和Ｃ４８１（５∶Ａ型）对营养的需要较高，在一般培养基上生长不良，相比之下，Ｃ４８１比Ｐ１０５９生长更差，但在胰蛋白胨肉汤和加５ｍＬ／Ｌ血清的普通培养基中两株菌均生长丰盛；两株菌的生长曲线显示，Ｃ４８１在对数生长期的繁殖速度较快，最高菌数略低，但衰落期细菌死亡速度较慢；对培养基中ＮａＣｌ含量的要求，Ｃ４８１为０～２．７％，Ｐ１０５９为０．９％～２．１％；对ｐＨ的要求，Ｃ４８１为７．４～７．８，Ｐ１０５９为７．０～７．４；两株细菌用小白鼠连续传５代复壮后，对小白鼠的最小致死量（ＭＬＤ），Ｃ４８１为６个菌，Ｐ１０５９为９个菌。

关键词：禽霍乱巴氏杆菌理化特性白清型禽源多杀性