一种适用于现场检测的土壤DNA快速提取方法（英文）

作     者：颜晶莹 倪亮 李坤峰 沈星宇 

作者机构：浙江大学农业试验站 

出 版 物：《浙江大学学报(农业与生命科学版)》 (Journal of Zhejiang University(Agriculture and Life Sciences))

年 卷 期：2024年

核心收录：

学科分类：07[理学] 0713[理学-生态学] 

基　　金：the Experimental Technology Research Project of Zhejiang University (SYB202138) National Natural Science Foundation of China (32000195) 

主　　题：土壤DNA DNA提取 现场检测 聚合酶链反应 RPA-CRISPR/Cas12a 

摘      要：土壤DNA提取是开展微生物群落分析、基因漂移检测等不同领域研究的重要基础，然而可用于野外现场检测的土壤DNA提取方法目前还十分欠缺。本研究旨在建立一种适用于现场检测的土壤DNA快速提取方法。首先，利用优化后的裂解液来分离土壤中的DNA，并基于柱式法，利用过滤膜和DNA吸附膜来纯化DNA。同时，用注射器取代离心机来辅助样品过滤，从而使该方法对仪器的需求降低，并使单个样品的提取时间小于20 min。随后，利用该方法提取不同类型土壤的DNA，证明该方法具有较广的样品适用性，并且对土壤样品量的需求低至0.1 g，而所获得的土壤DNA含量在一定程度上高于商业化试剂盒。进一步的研究证实，这些提取的基因组DNA可直接用于聚合酶链反应（polymerase chain reaction, PCR）分析，包括普通PCR、定量PCR和重组酶聚合酶扩增（recombinase polymerase amplification, RPA）-CRISPR/Cas12a可视化检测。此外，该方法还可以同时提取土壤中残留植物组织的DNA，为土壤植物和微生物的综合分析奠定了基础。本研究提出的土壤DNA快速提取方法具有潜在的应用前景。