口蹄疫病毒Asia1型猪源中和抗体的筛选与抗原表位鉴定

作     者：董开恒 黄书伦 李凤娟 李坤 刘果 张强 包慧芳 李洪炫 卢曾军 张小丽 

作者机构：甘肃农业大学动物医学院 动物疫病防控全国重点实验室兰州大学动物医学与生物安全学院国家口蹄疫参考实验室中国农业科学院兰州兽医研究所 甘肃省病原生物学基础学科研究中心 

出 版 物：《畜牧兽医学报》 (Acta Veterinaria et Zootechnica Sinica)

年 卷 期：2024年

核心收录：

学科分类：090601[农学-基础兽医学] 09[农学] 0906[农学-兽医学] 

基　　金：“十四五”国家重点研发项目(2021YFD1800300) 

主　　题：口蹄疫病毒 Asia1型 猪源单克隆抗体 抗原表位 

摘      要：Asia1型口蹄疫病毒（FMDV）仍然在我国周边国家存在，对我国畜牧业造成长期威胁。本研究旨在利用单个B细胞抗体技术研制Asia1型FMDV的中和性单克隆抗体，以此为工具，鉴定Asia1型FMDV的保护性抗原位点。以FMDV Asia1/JS/05为诱饵抗原，通过流式细胞术分选免疫猪PBMCs中的抗原特异性B细胞，通过巢式PCR扩增单个B细胞IgG抗体重链与轻链可变区基因序列，分别构建IgG抗体重链与轻链表达质粒，将其共转染CHO-S细胞进行抗体表达；通过间接ELISA、间接免疫荧光试验（IFA）、病毒中和试验（VNT）验证抗体反应性和中和活性，利用免疫印迹、中和抗体逃逸突变株筛选鉴定中和抗体所识别的抗原表位类型和抗原表位关键氨基酸。结果显示：获得了5株反应性良好的Asia1型FMDV特异性抗体，其中PD3和PD7为中和抗体，两株中和抗体识别相同表位，关键氨基酸为VP2蛋白72位残基（D）。本研究首次获得Asia1型FMDV特异性猪源中和抗体，鉴定VP2 72D是中和表位的关键氨基酸，进一步丰富了Asia1型FMDV抗原位点信息，为FMDV Asia1型分子疫苗和新诊断检测技术研究的奠定了基础。